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陜西實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-06-21

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細(xì)胞培養(yǎng)基,、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基,、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類,。(balancedsaltsolution,,BSS)BSS主要是由無機(jī)鹽,、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng),。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等,。幾種常用的BSS配方如下(表1-1),。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液,。因?yàn)镃a2+,、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,參與細(xì)胞粘附等功能,,使用不含Ca2+,、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng),;后者緩沖能力較強(qiáng),,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,,如血漿,、血清,、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富,,培養(yǎng)效果良好,,但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜,、批間差異大,。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液,、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少,。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng),、原代細(xì)胞分離,、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。陜西實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基

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    Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,,代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),,同時(shí),用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成,,有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定,,適合用于非CO2平衡環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng),、原代(如胚胎和成人組織)細(xì)胞分離,、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,,是體外培養(yǎng)中為預(yù)防微生物污染常用的***,,其中,青霉素能夠干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,,對革蘭陽性菌特別有效,;而鏈霉素能夠與細(xì)菌核糖體30S亞單位結(jié)合,抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成,,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預(yù)防絕大部分的細(xì)菌污染,。本產(chǎn)品含有多類細(xì)胞培養(yǎng)所需的氨基酸,、維生素、無機(jī)鹽等多種成分,,但不含蛋白質(zhì),、脂類或任何生長因子,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。 河北細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基–DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)現(xiàn)已廣應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng),。

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    可在血清含量低時(shí)用,,適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細(xì)胞,,也是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基,。DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后營養(yǎng)成份豐富,,血清使用量也減少,。常作為開發(fā)無血清細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基,。與天然培養(yǎng)基相比,,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,,因此,,細(xì)胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時(shí)必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,,以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的做法是添加5~10%的血清,,這樣才能維持細(xì)胞活力,,促進(jìn)細(xì)胞增殖。針對不同的動(dòng)物細(xì)胞,,現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化,、個(gè)性化的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基配方,,營養(yǎng)成份更加豐富,,血清使用量可降低至1~3%,由此可減少了血清等動(dòng)物來源成份對生物制品安全性的影響,。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基(serumfreemedium,,SFM)經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,,簡化分離純化步驟,,避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,,達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求,,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。

    無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,,才能幫助細(xì)胞貼壁生長,,包括以下幾大類物質(zhì):1)促貼壁物質(zhì):一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白,、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,,對許多細(xì)胞的繁殖和分化,,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞,、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞,、腎上皮細(xì)胞,、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞,、成肌細(xì)胞等,。2)促生長因子:針對不同細(xì)胞添加不同的生長因子,。也是刺激細(xì)胞生長、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),,有些是許多細(xì)胞必不可少的,,如胰島素。3)酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞,,需要用胰酶消化傳代,,在無血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑,。4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白,。牛血清白蛋白的添加量比較大,,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5)微量元素:硒是常見的,。TNM-FH昆蟲培養(yǎng)基可用于各種鱗翅類昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng),。含有多類細(xì)胞培養(yǎng)所需的氨基酸、無機(jī)鹽等多種成分,。

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在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)里,DMEM 培養(yǎng)基的使用過程需嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范,。收到培養(yǎng)基后,,應(yīng)及時(shí)存放于 2-8°C 的環(huán)境中,低溫可有效減緩培養(yǎng)基內(nèi)成分的降解速度,,確保其營養(yǎng)成分的穩(wěn)定性,。在使用前,,需將培養(yǎng)基預(yù)熱至 37°C,模擬人體體溫環(huán)境,,讓細(xì)胞在適宜溫度下開啟生長旅程,。同時(shí),由于 DMEM 培養(yǎng)基多采用碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),,需將培養(yǎng)環(huán)境的 CO?濃度維持在 5 - 10%,以此精細(xì)調(diào)控培養(yǎng)基的 pH 值處于 7.2 - 7.4 的生理適宜區(qū)間,,為細(xì)胞打造穩(wěn)定且舒適的 “居住空間”,,促進(jìn)細(xì)胞健康生長。高糖 DMEM 適合生長快,、粘附低的細(xì)胞,如腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng) ,。江蘇樣本細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商家

Fischer’s培養(yǎng)基不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子,,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用,。陜西實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基

    動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(animalcellculture)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,,將它分散成單個(gè)細(xì)胞(使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶)然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖,。細(xì)胞培養(yǎng)基的種類有哪些?按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基,、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類,。DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L),、高糖(4500mg/L)兩種類型,。細(xì)胞生長快。附著稍差的腫瘤細(xì)胞,、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,,常用于雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。2.神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基可為神經(jīng)元生長提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì),。IPL-41昆蟲培養(yǎng)基(IPL-41InsectMedium)旨在用于大規(guī)模擴(kuò)增草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)細(xì)胞系,,也常用于通過桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(BEVS)進(jìn)行蛋白表達(dá)。IPL-41培養(yǎng)基是對原始IPL配方的改良,,由美國農(nóng)業(yè)部昆蟲病理實(shí)驗(yàn)室Weiss等人開發(fā),用于大規(guī)模擴(kuò)增草地貪夜蛾衍生細(xì)胞系,。Weiss向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入了胎牛血清和TPB培養(yǎng)基(TryptosePhosphateBroth),,成功地實(shí)現(xiàn)了IPL-21AE。陜西實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基

深圳市華晨陽科技有限公司是一家致力于核酸檢測,、分子診斷、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),、病毒檢測等產(chǎn)品研發(fā),、生產(chǎn)、銷售于一體的國家高新技術(shù)企業(yè),。公司擁有二十多項(xiàng)**,部分專利已經(jīng)轉(zhuǎn)化應(yīng)用于市場,。產(chǎn)品主要應(yīng)用于基因檢測,、醫(yī)療機(jī)構(gòu),、生物制藥,、大型甲等醫(yī)院、出入境檢驗(yàn)檢疫,、診斷試劑,、疾控機(jī)構(gòu),、刑偵法醫(yī)鑒定等。近年來,,公司不斷加大自主研發(fā)投入,,積極引進(jìn)人才和技術(shù),并與國內(nèi)外多家科研機(jī)構(gòu),、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所以及三甲醫(yī)院,、基因檢測公司,、疾病預(yù)防控制中心等科研機(jī)構(gòu)有著緊密合作,促進(jìn)人類健康產(chǎn)業(yè)大發(fā)展,。