其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸,、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物,。在此基礎(chǔ)上,DMEM,、IMDM,、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來,。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹,。MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型,;有高壓滅菌型的,,也有過濾除菌型的;還有含非必需氨基酸的類型,。是基本,、適用范圍廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,,各成分份量加倍,,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型,。細胞生長快,。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng),。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎(chǔ)上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等,??捎糜陔s交瘤細胞培養(yǎng),以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基,。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設計,,含有BSS、21種氨基酸,、維生素等,,適于多種正常細胞和腫瘤細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng),。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素,。DMEM/F12培養(yǎng)基是在DMEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營養(yǎng)成分,。福建醫(yī)用細胞培養(yǎng)基供應商家
1.細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基,、無血清細胞培養(yǎng)基,、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,,BSS)BSS主要是由無機鹽,、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng),。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等,。幾種常用的BSS配方如下(表1-1),。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液,。因為Ca2+,、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,,使用不含Ca2+,、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外,,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng),;后者緩沖能力較強,,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,,如血漿,、血清、雞胚浸出液等,。其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富,,培養(yǎng)效果良好,但缺點是成分復雜,,來源受限且制作過程復雜,、批間差異大,。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少,。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物,。黑龍江正規(guī)細胞培養(yǎng)基全國發(fā)貨M199全稱Medium 199,,廣泛應用于各種動物細胞的培養(yǎng),包括一些非哺乳類動物細胞,。
細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基,、合成細胞培養(yǎng)基,、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類,。(balancedsaltsolution,,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗,、配制其他試劑等,。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液,。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,,參與細胞粘附等功能,,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團,。此外,,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,,適合于密閉培養(yǎng),;后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件,。表1-1幾種常用的BSS配方,。
在細胞培養(yǎng)實驗里,DMEM 培養(yǎng)基的使用過程需嚴謹規(guī)范,。收到培養(yǎng)基后,,應及時存放于 2-8°C 的環(huán)境中,低溫可有效減緩培養(yǎng)基內(nèi)成分的降解速度,,確保其營養(yǎng)成分的穩(wěn)定性,。在使用前,需將培養(yǎng)基預熱至 37°C,,模擬人體體溫環(huán)境,,讓細胞在適宜溫度下開啟生長旅程,。同時,由于 DMEM 培養(yǎng)基多采用碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),,需將培養(yǎng)環(huán)境的 CO?濃度維持在 5 - 10%,,以此精細調(diào)控培養(yǎng)基的 pH 值處于 7.2 - 7.4 的生理適宜區(qū)間,為細胞打造穩(wěn)定且舒適的 “居住空間”,,促進細胞健康生長,。MCDB 131培養(yǎng)基不同于傳統(tǒng)培養(yǎng)基之處在于,其含有微量元素,、腐胺,、腺嘌呤及更高濃度的氨基酸和維生素。
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基RPMI-1640是Moore等人開發(fā)出來的,,RPMI是該研究所開發(fā)的一類細胞培養(yǎng)基,,1640是培養(yǎng)基代號。
RPMI-1640是改進型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基,,使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),,與大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方。
RPMI-1640培養(yǎng)基常初是為淋巴細胞培養(yǎng)專門設計的,,現(xiàn)在已廣泛應用于各種正常細胞和ai細胞的培養(yǎng),,包括HeLa細胞、Jurkat細胞,、MCF-7細胞,、PC12細胞、PBMC細胞,、星形膠質(zhì)細胞和ai細胞,,是使用常為廣的培養(yǎng)基之一。
RPMIRPMI1640培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨特的效果,,是因為其中含有還原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素,。RPMI1640培養(yǎng)基含有生物素、維生素B12以及PABA,,這些成分是Eagle’sMEM和DMEM所不具備的,。針對廣的細胞培養(yǎng)應用,我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基,。
Ham’s F-12常作為無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)液,,在低血清含量下時,特別適合單細胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng),。四川iclean細胞培養(yǎng)基源頭直供
DMEM/F12培養(yǎng)基常作為開發(fā)無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ),,也適用于低血清含量下哺乳動物細胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)。福建醫(yī)用細胞培養(yǎng)基供應商家
培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素,細胞通常可耐受260mOsm/kg~320mOsm/kg,。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動,。特別注意:向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓,,特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì),。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細胞所需pH在-,。但是,,細胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細胞系則需要偏酸pH(-),。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,,因此,氣相中的CO2濃度應與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡,。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設定在5%,,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為;如果CO2濃度維持在10%,,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為,。細胞培養(yǎng)瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換,。HEPES是一種非離子緩沖液,,在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,,在高濃度時對一些細胞可能有毒,。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉()共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加,。在這種培養(yǎng)條件下,,細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中,。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色,。福建醫(yī)用細胞培養(yǎng)基供應商家
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