蛋白質翻譯后修飾組學：蛋白質翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質進行共價加工的過程,。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,，可以改變蛋白質的物理、化學性質,，進而影響蛋白質的空間構象和活性狀態(tài),、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質-蛋白質相互作用,。蛋白質翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,，異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質譜可以分辨蛋白質修飾前和修飾后分子量上的變化,，因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量,。蛋白質磷酸化修飾組學具有有效性。江蘇蛋白質泛素化修飾組學

蛋白質翻譯后修飾組學：血漿蛋白糖基化修飾分析：蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程,，是一種常見的蛋白質翻譯后修飾,。分泌的細胞外蛋白常被糖基化，糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白,。血漿中的蛋白質包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質和機體分泌,、滲漏、脫落的蛋白質,，其中不乏存在一些糖基化蛋白質,。而蛋白質糖基化修飾不只影響蛋白質的空間構象、生物活性,、運輸和定位,，而且在分子識別、細胞通信,、信號轉導等特定生物過程中發(fā)揮著至關重要的作用,。因此對血漿蛋白糖基化進行分析，有助于研究血漿蛋白的生理功能等,。北京蛋白質甲基化修飾組學研究在細胞中,，乙酰化修飾的反應由乙?；D移酶所催化,，將乙酰輔酶A的乙酰基轉移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上,。

蛋白質磷酸化修飾組學技術優(yōu)點：1,、全方面性：磷酸化蛋白質組學以整個細胞蛋白為研究對象，研究內容包括了細胞內具有生命功能的蛋白，如細胞增生,、細胞分裂和細胞分化等相關蛋白,，因而研究更為全方面。2,、可靠性：傳統(tǒng)的生物學研究蛋白質磷酸化往往針對特定條件,，以兩個蛋白或更多蛋白之間的相互作用為出發(fā)點，具有局限性,，缺乏整體認識。磷酸化蛋白質組學則可檢測不同蛋白激酶及磷酸化酶對同一個蛋白磷酸化程度的影響,，因而結果具有普遍性和可靠性,。3、有效性：磷酸化蛋白質組學反映的是細胞內真實發(fā)生的事件,，在一次試驗中考慮了不同變量,，克服了生物學中逐步添加變量的缺陷。4,、探索性：磷酸化蛋白質組學以細胞內蛋白為研究對象,，相對于傳統(tǒng)的生物學研究以及蛋白質芯片，更易發(fā)現(xiàn)未知的新磷酸化位點和磷酸化蛋白質,。如果可以聯(lián)合生物學技術,，則可以發(fā)現(xiàn)具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。

蛋白質乙?；揎楄b定流程：1. 組織/細胞破碎,，提取、提純目的蛋白質,。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?；揎楇亩芜M行免疫富集,。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進行鑒定分析,。5. 數(shù)據(jù)分析,，并對鑒定的乙酰化位點的生物學功能進行解釋預測,。隨著蛋白質組研究的發(fā)展,，我們越來越深刻地意識到，對于生物體生命活動的管理和調控過程,，密切相關的不只是單個蛋白質層面的修飾狀態(tài),，更重要的是研究蛋白質組學水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質、高效的蛋白質翻譯后修飾富集技術和豐富的,、準確的定量手段使得研究蛋白質水平的翻譯后修飾組學成為現(xiàn)實,，借助這些組學研究手段能夠實現(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較，深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系,。在早期的研究中,，乙酰化修飾一直被認為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾,。

蛋白質乙?；揎椊M學技術：乙酰化修飾是體內保守的可逆轉的蛋白修飾,，對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著重要的作用,。此外，還存在的非組蛋白乙?；揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調節(jié),。采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,，再結合免疫共沉淀通過抗體富集乙?；碾亩危瑥亩鴮崿F(xiàn)乙?；蔫b定及定量,。樣品要求：1、SDS-PAGE條帶：5個以上可見考染條帶,。2,、溶液（目標蛋白質）：目標蛋白總量>50μg，目標蛋白濃度>80%,。3,、溶液（大規(guī)模混合蛋白質）：蛋白總量>1mg,，蛋白濃度>1μg/μl,。乙酰化修飾對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著非常重要的作用,。廣東琥珀?；揎椀鞍踪|組學質譜分析

常見的蛋白質翻譯后修飾包括磷酸化。江蘇蛋白質泛素化修飾組學

蛋白磷酸化檢測方法：質譜檢測方法優(yōu)勢：1. 準確度高,，能夠同時檢測多個蛋白的多個磷酸化位點,。2. 適用于大規(guī)模分析蛋白磷酸化水平。3. 不依賴于磷酸化抗體,。在實際應用中,，Western Blot與質譜分析方法各有各的好,，誰也無法完全被另一種方法所替代。所以在選擇測定磷酸化修飾的時候還應該根據(jù)具體需要來決定,。如果研究的蛋白正好有商業(yè)化的磷酸化抗體,，那么lucky you，你可以選擇Western Blot進行快速磷酸化測定研究,。但是如果你所研究的蛋白質沒有可用的商業(yè)化磷酸抗體,，或是抗體價效過低，亦或是需要大規(guī)模地檢測細胞內磷酸化蛋白的水平的話,，質譜檢測會是更好地選擇,。江蘇蛋白質泛素化修飾組學

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