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河南動物靶向代謝組學技術(shù)

來源: 發(fā)布時間:2022-03-07

代謝組學概念:代謝組學主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000),。 在食品安全領域,,利用代謝組學工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動植物體內(nèi)的相關(guān)生物標志物也是一個熱點領域。其樣品主要是動植物的細胞和組織的提取液,。主要技術(shù)手段是核磁共振(NMR),,質(zhì)譜(MS),,色譜(HPLC,GC),,其中以NMR為主,。通過檢測一系列樣品的NMR 譜圖,再結(jié)合模式識別方法,,可以判斷出生物體的病理生理狀態(tài),,并有可能找出與之相關(guān)的生物標志物(biomarker)。代謝組學主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(分子量<1000),。河南動物靶向代謝組學技術(shù)

選擇代謝組學作為科研技術(shù)手段的優(yōu)勢有哪些,?代謝組學的研究處于生物信息流的中游,介于基因,、蛋白質(zhì)和細胞,、組織之間,在生物信息的傳遞中起到承上啟下的作用。小分子的產(chǎn)生和代謝是基因表達的下游產(chǎn)物,,生物體液的代謝產(chǎn)物分析能夠更直接,,更準確的反映生物體的病理生理狀態(tài)。代謝物的種類少,,大約在103個數(shù)量級,,要遠小于基因和蛋白質(zhì)的數(shù)據(jù),物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)要簡單得多,,分析起來更簡單明了,。代謝組學的代謝物信息庫簡單,它遠沒有全基因組測序及大量表達序列標簽的數(shù)據(jù)庫那么復雜,?;蚝偷鞍踪|(zhì)表達的有效微小變化會在代謝物上得到放大,從而使檢測更容易,。代謝產(chǎn)物在各個生物體系中都是類似的,,所以代謝組學研究中采用的技術(shù)更容易在各個領域中通用,也更容易被人接受,。河南GC-MS非靶向代謝組學定量分析代謝組學作為系統(tǒng)生物學的重要組成部分,,在臨床醫(yī)學領域具有普遍的應用前景。

代謝組學的研究分為靶向和非靶向,。通俗說就是你有沒有目標分子。傳統(tǒng)代謝組學研究利用的是GC-MS,,因為代謝物大多數(shù)都不是高沸點的,,而且GC-MS有龐大的數(shù)據(jù)庫檢索。然后發(fā)展的LC-MS差不多,,就是克服了一些高沸點物質(zhì)難以檢測的弊端,。NMR用于代謝組學不是很多,一方面是NMR這個東西入行起點有點高,,另一方面是樣品太復雜而且靈敏度不高,。但是NMR樣品處理簡單,無損,。不需要各種衍生化,。而且NMR對于物質(zhì)結(jié)構(gòu)的指認要比MS更精確(比如異構(gòu)體)因此對定性非常有用,成為非靶向代謝組學的重要方法,。

GC-MS非靶向代謝組學能檢測到哪些類別的代謝物,?衍生化極大地拓展了GC/MS的檢測分析范圍。GC/MS能檢測到有機酸,、氨基酸,、單糖、糖醇,、胺類,、脂肪酸,、吲哚、單甘油酯,、核苷,、二糖、生育酚,、甾醇和膽汁酸等代謝物,。如何提高定性準確度?GC/MS的定性有雙重標準,,一是保留指數(shù),,二是質(zhì)譜信息的相似度(similarity)。不同于LC/MS的軟電離源,,GC/MS使用的EI源屬于硬電離,,能量較強且穩(wěn)定,在將代謝物分子電離后,,分子離子峰進一步碎裂產(chǎn)生豐富的碎片離子,。因此,我們很難在GC/MS上看到分子離子峰,。GC/MS提供的是代謝物的“指紋圖譜”,,將儀器得到的實際指紋圖譜和質(zhì)譜庫(如NIST庫)進行比對后,我們將會得到一個叫相似度的指標,。保留指數(shù)和相似度都必須滿足設定的閾值,,軟件才會給出色譜峰的定性結(jié)果。然后采用標準品質(zhì)譜信息進行完全比對定性,,也就是說只有經(jīng)過標準品比對,,代謝物才是被100%定性。代謝組學是要涉及研究每一個代謝組分的共性,、特性和規(guī)律,。

代謝組學可以檢測的樣品種類有哪些?代謝組學主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(分子量<1000),。其樣品主要是血漿或血清,,尿液,唾液,,以及細胞和組織的提取液,。我們也和一些公司或單位(如茶葉公司、制酒公司,、酸奶公司,、醫(yī)院等)合作,做過植物,微生物提取物,,腦脊液,,昆蟲血淋巴,羊水,,卵泡液,,膝蓋滑液,眼淚,,胎盤,,糞便及腸道內(nèi)容物提取液等。一般代謝組學能檢測出多少物質(zhì),?同的質(zhì)譜平臺靈敏度及偏向性都不一樣,,而且不同平臺之間具有互補性。一般來說GC/MS檢測血清樣品能準確定性的物質(zhì)約200個左右,,檢測尿液樣品定性的物質(zhì)約200個左右,,其他樣品(如肝臟,糞便,,腸道內(nèi)容物)也在幾百這個數(shù)量級,。如果采用全二維GC/MS,物質(zhì)的數(shù)量要更多,,可達1千以上,。LC/MS檢測物質(zhì)的數(shù)量要遠比GC/MS多,但能準確定性和定量的不多,,視不同的平臺(TQ,、QTOF等)能達到幾十至2-3百個物質(zhì)。非靶向代謝組學無偏向性地對所有小分子代謝物(一般相對分子量小于1000),。哈爾濱LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學分析價格

代謝組學作為系統(tǒng)生物學的一個重要的分支,與其他組學相比有著其特有的優(yōu)勢,。河南動物靶向代謝組學技術(shù)

代謝組學樣本收集植物組織:葉片,、莖、花:1)取整片葉片/一段莖/一朵花,,放入離心管或錫箔紙中并標記,,迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min。2)將裝有樣本的離心管迅速放入自封袋中(每組一袋),,在自封袋中放入標簽紙注明樣本信息,。3)迅速放入-80 ℃冰箱凍存。足量干冰寄送,。注意:(1)采集葉片樣本時,,在中午光照好的時間收集。(2)采集樣本時保持樣本一致性,尤其是同一組樣本(顏色,、衰老程度,、葉脈占比、光照,、位置等),。根:1)取整株植物的根部,迅速用PBS緩沖液或者超純水漂洗掉根上的泥土,、培養(yǎng)基或營養(yǎng)液等,;2)吸水紙吸干水分后,分裝為500 mg/管,;3)標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,,-80 ℃凍存,干冰寄送,。河南動物靶向代謝組學技術(shù)

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