蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析自中而下分析策略：自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,，直到得到純化的組蛋白,。提取組蛋白后，用GluC進(jìn)行消化,。然后用弱陽(yáng)離子交換/親水相互作用色譜（WCX-HILIC）與配備電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機(jī)聯(lián)用,，對(duì)樣品進(jìn)行理想的分離。譜識(shí)別可以用傳統(tǒng)的軟件進(jìn)行,，但是由于估計(jì)適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率的問(wèn)題,，需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行過(guò)濾。自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對(duì)其進(jìn)行片段化,，不需要蛋白質(zhì)水解消化,。目前，有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法：離線和在線,。前者用四維分離法,，后者用WCX-HILIC。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題,？湖北磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測(cè)方法：質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一，可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測(cè),。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications,，PTMs），如磷酸化,、乙?；⒎核鼗?、SUMO化,、糖基化等，大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性,。檢測(cè)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,，了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對(duì)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個(gè)富集步驟,，因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低,。大多數(shù)PTMs檢測(cè)方法都是結(jié)合富集策略開(kāi)發(fā)的，以比較好的識(shí)別,、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能,。廣東丙二酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)研究自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析,。

什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,？蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（）是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō),，這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟,。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分。通過(guò)向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過(guò)蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來(lái)改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),，是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟,。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個(gè)過(guò)程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,，并影響表觀遺傳學(xué),。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義？在哺乳動(dòng)物細(xì)胞生命周期中,，大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過(guò)磷酸化修飾,，在脊椎動(dòng)物基因中，約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過(guò)程的蛋白激酶和磷酸酶,。它可以通過(guò)激發(fā),、調(diào)節(jié)諸多信號(hào)通路進(jìn)而參與調(diào)控生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育,、逆境應(yīng)激,、疾病發(fā)生等多種生命過(guò)程，一直是生物學(xué)研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn),。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)（P04）轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上（主要包括絲氨酸S,、蘇氨酸T、酪氨酸Y）,，從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過(guò)程,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。

蛋白質(zhì)乙?；揎椀墓δ埽耗壳皩?duì)乙?；揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控，以及對(duì)代謝通路的調(diào)控這兩個(gè)方面,。在眾多乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)中,，研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。組蛋白和DNA纏繞構(gòu)成核小體,，組蛋白的甲基化,、乙酰化修飾能夠調(diào)節(jié)DNA纏繞的松緊度,，從而對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,，因此，組蛋白的翻譯后修飾是表觀遺傳學(xué)研究中的重要一環(huán),。另外,，研究也發(fā)現(xiàn)乙酰化修飾普遍存在于人的多種代謝酶之中,，并且參與調(diào)控代謝通路以及代謝酶的活性,。其中在肝臟這樣的代謝中就存在著多種代謝酶被高度乙酰化,。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。廣州蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)分析

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)磷酸化修飾具有靈活的特性。湖北磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)乙?；揎楄b定流程：1. 組織/細(xì)胞破碎,，提取、提純目的蛋白質(zhì),。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 使用高效特異性乙酰化抗體對(duì)乙?；揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集,。4. 使用LC-MS/MS對(duì)富集的乙酰化肽段進(jìn)行鑒定分析,。5. 數(shù)據(jù)分析,，并對(duì)鑒定的乙酰化位點(diǎn)的生物學(xué)功能進(jìn)行解釋預(yù)測(cè),。隨著蛋白質(zhì)組研究的發(fā)展,，我們?cè)絹?lái)越深刻地意識(shí)到，對(duì)于生物體生命活動(dòng)的管理和調(diào)控過(guò)程,，密切相關(guān)的不只是單個(gè)蛋白質(zhì)層面的修飾狀態(tài)，更重要的是研究蛋白質(zhì)組學(xué)水平研究在翻譯后修飾的動(dòng)態(tài)變化,。高質(zhì),、高效的蛋白質(zhì)翻譯后修飾富集技術(shù)和豐富的、準(zhǔn)確的定量手段使得研究蛋白質(zhì)水平的翻譯后修飾組學(xué)成為現(xiàn)實(shí),，借助這些組學(xué)研究手段能夠?qū)崿F(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,，深入地揭示翻譯后修飾水平的波動(dòng)與生物生命活動(dòng)的密切聯(lián)系,。湖北磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

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