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南京全轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究方法

來源: 發(fā)布時間:2022-03-10

轉(zhuǎn)錄組學(xué):隨著越來越多的基因組序列相繼被測定,生命科學(xué)的研究進(jìn)入了后基因組時代,各類組學(xué)技術(shù)得到迅速地發(fā)展與普遍地應(yīng)用包括以基因為研究對象的基因組學(xué)(Genomics)、以轉(zhuǎn)錄過程為研究對象的轉(zhuǎn)錄組學(xué)(Transcriptomics),。意義:1.轉(zhuǎn)錄組譜可以提供特定條件下某些基因表達(dá)的信息,并據(jù)此推斷相應(yīng)未知基因的功能,揭示特定調(diào)節(jié)基因的作用機制.2.通過基于基因表達(dá)譜的分子標(biāo)簽,不只可以辨別細(xì)胞的表型歸屬,還可以用于疾病的診斷.3.轉(zhuǎn)錄組的研究應(yīng)用于臨床的另一個例子是可以將表面上看似相同的病癥分為多個亞型,尤其是對原發(fā)性惡性瘤,通過轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)譜的建立,可以詳細(xì)描繪出患者的生存期以及對藥物的反應(yīng)等,。轉(zhuǎn)錄組學(xué)能準(zhǔn)確地識別可變剪切位點及cSNP,UTR區(qū)域。南京全轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究方法

轉(zhuǎn)錄組學(xué)(Transcriptome)廣義上指某一生理條件下,,細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的匯合,包括信使RNA(mRNA),、核糖體RNA(rRNA),、轉(zhuǎn)運RNA(tRNA)及非編碼RNA(ncRNA);狹義上指所有mRNA的匯合,。轉(zhuǎn)錄組具有很強的時間和空間特性,,是基因功能及結(jié)構(gòu)研究的基礎(chǔ)和出發(fā)點,,掌握了生物個體基因轉(zhuǎn)錄水平的變化,可深入了解其生命活動特征和調(diào)控機制,。通過新一代高通量測序,能夠全方面快速地獲得某一物種特定組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本的基因序列信息,。深圳靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)檢測價格轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)的概念:轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細(xì)胞在某一發(fā)育階段或功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的匯合,,包括蛋白質(zhì)編碼的信使RNA和非編碼RNA(rRNA、tRNA和其他ncRNAs),,高通量測序技術(shù)也被稱為下一代測序(NGS)技術(shù),,推進(jìn)了基因組學(xué)的研究進(jìn)展。該項新技術(shù)除了研究靜態(tài)基因組,,近年來也開始應(yīng)用于動態(tài)轉(zhuǎn)錄分析,,由此衍生的技術(shù)稱為RNA序列分析(RNA-seq)隨著DNA基因芯片技術(shù)的快速發(fā)展,,開創(chuàng)了這個病癥近十年的高通量轉(zhuǎn)錄組研究,。RNA-Seq技術(shù)可以從轉(zhuǎn)錄水平檢測瘤中的改變基因。通過相關(guān)軟件分析,,鑒定相關(guān)改變基因在瘤發(fā)生的發(fā)展中所起的作用,。然后經(jīng)過刷選,,進(jìn)一步挑選出相關(guān)靶基因進(jìn)行實驗研究,有望為瘤的基因醫(yī)治提供新的靶點,。

轉(zhuǎn)錄組分析是目前應(yīng)用比較廣的高通量測序分析技術(shù)之一,。常見設(shè)計是不同樣品之間比較,,尋找差異基因、標(biāo)志基因,、協(xié)同變化基因,、差異剪接和新轉(zhuǎn)錄本,并進(jìn)行結(jié)果可視化,、功能注釋和網(wǎng)絡(luò)分析等,。轉(zhuǎn)錄組的測序分析也相對成熟,從RNA提取,、構(gòu)建文庫,、上機測序再到結(jié)果解析既可以自己完成,又可以在專業(yè)公司進(jìn)行,。概括來看轉(zhuǎn)錄組的分析流程比較簡單,,序列比對-轉(zhuǎn)錄本拼接(可選)-表達(dá)定量-差異基因-功能富集-定制分析。整個環(huán)節(jié)清晰流暢,可以作為剛開始接觸高通量測序?qū)W習(xí)比較合適的技術(shù)之一,。RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)有著巨大的應(yīng)用前景,。

circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)成環(huán)機制:circRNA環(huán)化方式分為內(nèi)含子環(huán)化和外顯子環(huán)化。目前主流的成環(huán)機制可歸類為:依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化,。在mRNA前體上,,通過連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′供體的位點連接到上游的3′受體的位點,索尾插接形成環(huán)化,,然后通過剪切形成circRNA,。順式作用元件促進(jìn)circRNA形成。部分circRNA外顯子兩側(cè)的內(nèi)含子中含有反向互補序列,,首先在剪切位點上并排形成RNA雙鏈體,,再通過可變剪切形成帶內(nèi)含子和不帶內(nèi)含子兩種不同的circRNA?;蛘咄怙@子內(nèi)部以及兩側(cè)的內(nèi)含子可以競爭進(jìn)行RNA配對,,然后通過可變剪切形成不同類型的circRNA。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于炎癥發(fā)生機制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù),。南京全轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究方法

轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況,。南京全轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究方法

全長轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序:由于在轉(zhuǎn)錄組研究中通常所使用的第二代測序技術(shù)具有測序讀長的限制,因此在進(jìn)行測序之前,,需要先將樣本的mRNA打碎為小片段,,之后再通過與參考基因組比對或拼接的方式識別轉(zhuǎn)錄本,這就會造成一定的錯誤比例,,同時在也很難區(qū)分單堿基水平的差異,。全長轉(zhuǎn)錄組測序的優(yōu)勢:1、全方面鑒定可變剪切,;2,、發(fā)現(xiàn)更多新基因;3,、有效改善基因組注釋,;4、鑒定更多的LncRNA,;5,、準(zhǔn)確定位融合基因。研究思路:由于全長轉(zhuǎn)錄組測序是基于第三代測序技術(shù),,因而其成本依然較高,,如果全部研究項目均基于全長轉(zhuǎn)錄組,通常來說很難承擔(dān),,因此,,全長轉(zhuǎn)錄組測序一般與普通轉(zhuǎn)錄組測序相結(jié)合,。南京全轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究方法

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