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來源: 發(fā)布時間:2022-04-03

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:質(zhì)譜鑒定法:在質(zhì)譜分析中,,先使試樣中各組分電離生成不同荷質(zhì)比的離子,然后經(jīng)加速電場的作用,,生成離子束,,進(jìn)入質(zhì)量分析器,。在質(zhì)量分析器中,在磁場的作用下,,質(zhì)荷比相同的離子會被聚焦到同一點(diǎn)上,,不同質(zhì)荷比的離子聚焦于不同點(diǎn)上,因此獲得區(qū)分不同質(zhì)荷比離子的質(zhì)譜圖,。與未經(jīng)修飾的肽段相比,,磷酸基團(tuán)修飾的肽段在相對分子質(zhì)量上就會增加79.983,由此在質(zhì)譜圖中能夠與未修飾肽段進(jìn)行區(qū)分,。固相金屬離子親和色譜利用的是磷酸基團(tuán)與固相化的金屬離子有高親和力,可有效吸附磷酸化基團(tuán),,從而達(dá)到富集磷酸化肽段的效果。鰲合底物上的金屬離子通常是Fe3+或Ga3+,,可以選擇性地與磷酸化肽中的磷酸部分相結(jié)合,并且在高pH或磷酸緩沖液中磷酸化肽可以釋放出來,。但是這個方法不能夠有效富集不與IMAC結(jié)合的磷酸化肽段。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有探索性,。上海蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)費(fèi)用

翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細(xì)胞過程的重要方式,,幾乎在每個細(xì)胞過程中都是不可或缺的,。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時對其的檢測,。因此,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,,純化方法是必要的,,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進(jìn)行后續(xù)分析,。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,,可以對翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。上海蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)費(fèi)用乙?;揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測方法:質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一,,可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),,如磷酸化,、乙酰化,、泛素化,、SUMO化、糖基化等,大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性,。檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,,了解它們?nèi)绾喂ぷ鳌⒂绊懙鞍踪|(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解,。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個富集步驟,,因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測方法都是結(jié)合富集策略開發(fā)的,,以比較好的識別,、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能。

蛋白磷酸化檢測方法:一,、Western Blot檢測方法優(yōu)勢:1. WB方法簡便,,多數(shù)實(shí)驗(yàn)室具備Western Blot設(shè)備條件。2. 許多磷酸化抗體十分靈敏,,能夠檢測低至10ug的蛋白樣品,。3. 對于豐度低的蛋白,可以先通過IP使用目標(biāo)蛋白的抗體對目標(biāo)蛋白進(jìn)行富集,,再進(jìn)行WB檢測被磷酸化的蛋白,,檢測效率可以提高幾倍甚至幾十倍。二,、質(zhì)譜檢測方法:Western Blot的方法雖然簡便,,但是對于大規(guī)模分析復(fù)雜的生物樣品的磷酸化水平就不再適用了。而質(zhì)譜卻能很好的解決這一問題,。依靠高準(zhǔn)確度質(zhì)譜儀,,如今快速準(zhǔn)確分析細(xì)胞中高豐度蛋白的磷酸化修飾已是非常簡單的事。具體的檢測方法為先通過SDS-PAGE膠,,或者2D-PAGE膠等分離目標(biāo)蛋白,,將含有目標(biāo)蛋白的條帶切下,胰酶消化,,LC-MS/MS檢測分析蛋白序列和相應(yīng)位點(diǎn)的磷酸化修飾,。這個方法適用于同時檢測多個目標(biāo)蛋白的磷酸化水平。目前對乙?;揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控,,以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)是一種基于肽段分析的技術(shù),。對于不同類型的翻譯后修飾,,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性,。不同的糖鏈可以連接到同一位點(diǎn)上,,不同位點(diǎn)可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上,。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),,在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,,導(dǎo)致信號分散。此外,,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進(jìn)行分離和富集,,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點(diǎn),。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動的多樣性和復(fù)雜性,。上海蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)費(fèi)用

蛋白質(zhì)修飾可檢測修飾類型有磷酸化,、糖基化,、乙酰化,、泛素化,、丙酰化,、丁酰化,、丙二?;I虾5鞍踪|(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)費(fèi)用

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