常用的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)方法有以下幾類:非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù):Label free定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),,比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強(qiáng)度,,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量,。TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):這種技術(shù)采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,,能夠同時比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。蛋白質(zhì)組學(xué)在應(yīng)用中,,更多地用于提供高通量蛋白質(zhì)定性定量信息,。南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)價格
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):生物質(zhì)譜:生物質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較重要的鑒定技術(shù),其基本原理是樣品分子離子化后,,根據(jù)不同離子之間的荷質(zhì)比(M/E)的差異來分離并確定分子量,。對于經(jīng)過雙向電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)用胰蛋白酶酶解(水解Lys或Arg的-C端形成的肽鍵)成肽段,對這些肽段用質(zhì)譜進(jìn)行鑒定與分析,。目前常用的質(zhì)譜包括兩種:基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS),。蛋白質(zhì)組的研究不但能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ),也能為眾多種疾病機(jī)理的闡明及攻克提供理論根據(jù)和解決途徑,。哈爾濱蛋白質(zhì)定量組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法主要有:蛋白質(zhì)雙向電泳,、氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序)、生物信息學(xué),。
定量N-糖基化蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)的N-糖基化位點修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,,主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點具有保守的氨基酸序列NX(S/T)(其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸)凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法,。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),,能專一識別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價結(jié)合,,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來,。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用lectin 富集 N- 糖基化肽段,,然后用 N- 糖酰胺酶(PNGase)在 H218O 中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈。
蛋白質(zhì)組學(xué)研究:蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要分為自底向上(Bottom-Up)和自頂向下(Top-Down)兩種策略,?!白缘紫蛏稀辈呗允侵竿ㄟ^分析由蛋白質(zhì)酶解生成的肽段來鑒定蛋白質(zhì)。當(dāng)應(yīng)用該策略來分析蛋白質(zhì)組混合物時,,因其類似于基因組測序的鳥管法,,所以又被稱為鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)(ShotgunProteomics)?!白皂斚蛳隆辈呗灾苯予b定完整蛋白質(zhì),,在翻譯后修飾和蛋白質(zhì)同素異構(gòu)體鑒定方面有一些潛在的優(yōu)勢??墒窃摬呗缘娜毕菔堑鞍踪|(zhì)在氣相中分離,、電離及碎裂都十分困難,。而鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)由于將蛋白質(zhì)酶解成肽段,使其在氣相中更容易被分離,、電離和碎裂,。所以鳥管法蛋白質(zhì)組學(xué)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中得到了比較普遍的應(yīng)用。近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,,如細(xì)胞生物學(xué),、神經(jīng)生物學(xué)等。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的,?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,,設(shè)計和建立針對這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進(jìn)行PRM數(shù)據(jù)采集,,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進(jìn)行定量,。另外,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,,用PRM額外做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線,,即可實現(xiàn)一定的定量,。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面,?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來,,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,,多肽的相對和一定的定量,,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,,想同時定量多個蛋白的情況等,,都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組學(xué)的分析主要指蛋白的生信分析,,依賴于數(shù)據(jù)庫的建立,。河南PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測價格
蛋白質(zhì)組和基因組在概念上有相關(guān)性。南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)價格
iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù):iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù),。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。Label-free:Label-free定量,,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),,不需要對比較樣本做特定標(biāo)記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達(dá)量的變化,,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),。南京定量N糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)價格