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貴州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

來源: 發(fā)布時間:2022-04-18

蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù):乙酰化修飾是體內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,,對細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用,。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié),。乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,,再結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解,。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,,調(diào)控包括細胞周期,、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細胞活動,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。貴州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢:1,、高特異性的修飾類泛抗體,;2、高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀,;應(yīng)用領(lǐng)域:泛素化修飾還參與了細胞周期、增殖,、細胞凋亡,、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、基因表達,、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞,、損傷修復(fù),、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān),。因此,,作為近年來生物化學(xué)研究的一個重大成果,它已然成為研究,、開發(fā)新藥物的新靶點,。江蘇蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)方法蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,,糖基化,,泛素化,亞硝基化,,甲基化,,乙酰化,,脂質(zhì)化和蛋白水解,。

乙酰化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用方向:1,、乙?;揎椗c細胞基因表達調(diào)控、表觀調(diào)控,、細胞凋亡,、細胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性等生理過程研究,。2,、乙酰化引起的代謝疾病,、代謝紊亂發(fā)生等疾病機理研究,。乙酰化生物學(xué)意義:1,、調(diào)節(jié)DNA-蛋白,、蛋白-蛋白相互作用;2、與其他PTMs發(fā)生crosstalk,;3、調(diào)節(jié)酶活性,;4,、調(diào)控蛋白亞細胞定位。生物領(lǐng)域各個研究方面,,如:1,、農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機制,生長發(fā)育機制,,育種保護研究等,;2、 畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,,致病機理研究等,。

乙酰化修飾蛋白組學(xué)實驗流程:1)組織/細胞破碎,,提取蛋白質(zhì),;2)蛋白酶解成多肽片段;3)對多肽片段進行 iTRAQ 標記,;4)高效特異性乙?;贵w富集乙酰化修飾肽段,;5)使用 LC-MS/MS 對富集的乙?;亩芜M行序列分析;5)數(shù)據(jù)分析,,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町悾Ξa(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進行解釋,。乙?;且粋€普遍而重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,不僅集中在對細胞染色體結(jié)構(gòu)的影響以及對核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子方面,,而且還影響參與細胞周期和新陳代謝,、肌動蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面,。乙酰化不僅存在于真核細胞中,,而且越來越多的證據(jù)也表明乙?;瑯佑绊懺S多原核細胞的生理生化過程。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位,。

甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué),、臨床診斷:生物標志物,疾病機理機制,,疾病分型,,個性化治理等;生物醫(yī)藥:藥物作用機理,,藥效評價,,藥物開發(fā)等;農(nóng)林領(lǐng)域:抗逆脅迫機制,,生長發(fā)育機制,,育種保護研究等;畜牧業(yè):肉類及乳品質(zhì)研究,,致病機理研究等,;微生物領(lǐng)域:致病機理,耐藥機制,,病原體-宿主相互作用研究等,;海洋水產(chǎn):漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等,。技術(shù)優(yōu)勢:采用抗體,特異性高,;鑒定通量高,, 一次可檢測高可達上千個甲基化修飾位點。已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾種類有20多種,。貴州蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)一般流程

蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程,。貴州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式

泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)樣品要求:1、動物組織的樣品量濕重不少于200mg,。2,、植物細菌、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g,。3,、富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于5g;如植物的根,,木質(zhì)部,、韌皮部組織等,。4、體液類(唾液,、羊水,、腦脊液等)10mL以上,要保證不能溶血,;血清要求500μl以上,;尿液要求50mL以上。5,、如直接提供蛋白質(zhì)提取物,,濃度不少于2 mg/mL,總量不少于1 mg,。為保證實驗效果,,請盡量告知緩沖液成分,,如是否有硫脲,、SDS、強離子鹽等等,。另樣品中應(yīng)不含核酸,、脂類、多糖等影響分離效果的成分,。6,、在細胞器蛋白質(zhì)組學(xué)方面,提取細胞器或亞細胞器后,,蛋白沉淀量在1 mg以上,。貴州泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要方式