蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,,然后通過(guò)高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,,通過(guò)相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配,,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn),。蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)分析樣品經(jīng)酶解后,,用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M(jìn)行富集,富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析,,并通過(guò)軟件完成數(shù)據(jù)檢索,。琥珀酰化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,,特異性高,,富集效率好。乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型,。廣州蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)質(zhì)譜鑒定
磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué):在有機(jī)體內(nèi),,磷酸化是蛋白翻譯后修飾中比較普遍的共價(jià)修飾形式,,同時(shí)也是原核生物和真核生物中比較重要的調(diào)控修飾形式。磷酸化對(duì)蛋白質(zhì)功能的正常發(fā)揮起著重要的調(diào)節(jié)作用,,該過(guò)程是由蛋白質(zhì)激酶(Kinase)催化的把ATP或GTP的γ位磷酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)的氨基酸殘基,,如絲氨酸(Serine,Ser,,S),、蘇氨酸(Threonine,Thr,,T)和酪氨酸(Tyrosine,,Tyr,Y)等上的過(guò)程,,而其逆向過(guò)程則是由蛋白質(zhì)磷酸酶去除相應(yīng)的磷酸基團(tuán),。正是這兩種酶的相反作用及其中所涉及到的能量消耗與生成使磷酸化成為體內(nèi)很多生理活動(dòng)調(diào)控的首先選擇方式。河南蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)主要技術(shù)常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化,。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程,。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理,、化學(xué)性質(zhì),,進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位,、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量,。
磷酸化修飾蛋白組學(xué)應(yīng)用:蛋白質(zhì)組(Proteome)泛指一個(gè)生命體內(nèi)所有蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,,研究細(xì)胞,、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué),是對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性,、定量及功能的分析,。定性分析包括鑒定蛋白質(zhì)的序列、PTM及蛋白之間的相互作用,,對(duì)比來(lái)看,,磷酸化蛋白質(zhì)組(Phosphoproteome)就是蛋白質(zhì)組中全部的磷酸化蛋白質(zhì),而磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)(Phosphoproteomics,,下文簡(jiǎn)稱PP)就是針對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)的全方面的分析,,包括對(duì)磷酸化的鑒定、定位和定量,。本來(lái)屬于蛋白質(zhì)組學(xué)的一個(gè)分支,,但隨著研究的深入,人們?cè)诟鱾€(gè)領(lǐng)域關(guān)于PP都有重大發(fā)現(xiàn),,基于PP的研究也越來(lái)越多,。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有有效性。
定量N-糖基化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué):蛋白質(zhì)的N-糖基化位點(diǎn)修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,,主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用,。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點(diǎn)具有保守的氨基酸序列NX(S/T)(其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸)凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),,能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,,通常用特定的單糖通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來(lái),。研究蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)服務(wù)
常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化,。廣州蛋白質(zhì)丙酰化修飾組學(xué)質(zhì)譜鑒定
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (Protein translational modifications,,PTMs) 通過(guò)功能基團(tuán)或蛋白質(zhì)的共價(jià)添加,、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個(gè)蛋白質(zhì)的降解來(lái)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性。這些修飾包括磷酸化、糖基化,、泛素化,、亞硝基化、甲基化,、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解,,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制的所有方面。因此,,識(shí)別和理解 PTM 在細(xì)胞生物學(xué)和疾病療理和預(yù)防的研究中至關(guān)重要,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加。PTMs 是一種化學(xué)修飾,,在功能蛋白質(zhì)組中發(fā)揮關(guān)鍵作用,,因?yàn)樗鼈冋{(diào)節(jié)活性、定位以及與其他細(xì)胞分子(如蛋白質(zhì),、核酸,、脂質(zhì)和輔助因子)的相互作用。廣州蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定