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湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-27

代謝組學(xué)樣本收集注意事項(xiàng):(1)血液離開動物或人體后,,應(yīng)盡快開展血清,、血漿的分離,并嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行,。(2)采集到的血清為黃色透明液體,、血漿為淡黃色半透明液體,,如果發(fā)現(xiàn)樣本中是紅色,說明在已經(jīng)發(fā)生了了溶血現(xiàn)象,,樣本需重新制備,。(3)血清與血漿的主要區(qū)別在于血清中不含纖維蛋白原。血清和血漿中脂質(zhì),,氨基酸,,核苷酸等代謝譜存在差別。糞便樣本收集:1.人糞便:(1)用無菌勺挖取新鮮的,,排泄中后部的內(nèi)側(cè)糞便(避免尿液及其他壁對樣本污染),;(2)分裝樣本20mg/管。(3)迅速放入液氮中冷凍處理至少15min.(4)-80℃冰箱凍存,。寄樣需足量干冰,。代謝組學(xué) (metabolomics)的出現(xiàn)是生命科學(xué)研究的必然。湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析

代謝組學(xué)細(xì)胞樣本收集:懸浮細(xì)胞:1)連同培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到1.5 mL的進(jìn)口離心管中,。2)低速離心5 min(低于3000 rpm),,使細(xì)胞沉淀于離心管的底部(1*107個(gè)細(xì)胞為宜)。3)倒掉培養(yǎng)基(盡量倒干凈),,用預(yù)冷的PBS反復(fù)沖洗2 ~ 3次,,低速離心5 min,棄上清,。4)標(biāo)記離心管,,將離心管的尖的一端插入液氮中,淬滅細(xì)胞沉淀1 min,,-80 ℃凍存,,干冰寄送。注意事項(xiàng):1. 培養(yǎng)基傾倒時(shí)盡量倒干凈,,可使用濾紙將殘留培養(yǎng)液吸凈,;2. 甲醇/水請使用色譜純及以上規(guī)格,;3. 液氮淬滅細(xì)胞時(shí),請小心避免離心管破碎導(dǎo)致樣本受損;4. 建議細(xì)胞樣本在進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)多準(zhǔn)備樣本,,以備后續(xù)使用,。上海LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析研究代謝組學(xué)有哪些特點(diǎn)?

代謝組學(xué)概念:代謝組學(xué)(metabonomics/metabolomics)是效仿基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究思想,,對生物體內(nèi)所有代謝物進(jìn)行定量分析,,并尋找代謝物與生理病理變化的相對關(guān)系的研究方式,是系統(tǒng)生物學(xué)的組成部分,。其研究對象大都是相對分子質(zhì)量1000以內(nèi)的小分子物質(zhì),。先進(jìn)分析檢測技術(shù)結(jié)合模式識別和**系統(tǒng)等計(jì)算分析方法是代謝組學(xué)研究的基本方法。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后新近發(fā)展起來的一門學(xué)科,,是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分,。

LC-MS非靶向代謝組學(xué):LCMS非靶向是通過液質(zhì)聯(lián)用(LC–MS)方法檢測生物體受擾動或刺激前后大量代謝產(chǎn)物的動態(tài)變化,從中找出表達(dá)差異的代謝物,,進(jìn)而闡明生物體代謝相關(guān)過程的代謝組學(xué)技術(shù),。LCMS非靶向代謝組學(xué)適用于分析難揮發(fā)或熱穩(wěn)定性差的代謝產(chǎn)物,具有高通量,、高分辨率,、高靈敏度的特點(diǎn)。超高壓液相色譜或超高效液相色譜(UPLC)通過采用更小粒徑的色譜填料配合更高的壓力,,實(shí)現(xiàn)了更好的分離,,具體包括更高的分離能力、更快的分離速度以及更好的靈敏度,;串聯(lián)質(zhì)譜儀在MS掃描模式下,,可實(shí)現(xiàn)高低碰撞能量快速切換,同時(shí)采集代謝物的一二級質(zhì)譜信息,,結(jié)合代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件對質(zhì)譜信息的解析,,在單次分析中可檢測和鑒定幾百至幾千種代謝物。代謝組學(xué)主要研究的是產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000),。

代謝組學(xué)樣本收集指南:1.血漿樣本收集:(1)從合適的靜脈采集血液(典型10mL)到標(biāo)記的肝素鋰血漿收集管中(肝素鋰用作抗凝劑),。(2)立即于4 °C離心(3000g)20min,上清液即為血漿,。(3)離心完畢,,取出血漿收集管,取上清液(血漿),,分等份(0.5mL或0.1mL),,轉(zhuǎn)移到凍存管中(冰上),旋蓋,。(4)保存于-80℃冰箱,。寄樣需足量干冰,。2.血清樣本收集:(1)從合適的靜脈采集血液(典型10mL)到血清收集管中。(2)將血清收集管冰水?。?℃)凝集至少1h(2h以內(nèi)),,記錄凝集時(shí)間。(3)將血清收集管放到冷凍離心機(jī)中低溫(4℃)離心15min(2500 g),。(4)離心完畢,取出血清收集管,,取上清液,,分等份(0.5mL或0.1mL),轉(zhuǎn)移到凍存管中(冰上),,旋蓋,。(5)保存于-80℃冰箱。寄樣需足量干冰,。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似,,通常有兩種方法。深圳LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)分析方法

代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似,。湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析

GC-MS非靶向與代謝組學(xué)的關(guān)系,?代謝組學(xué)是運(yùn)用多種技術(shù)手段,研究生物體系中小分子代謝物(包括氨基酸,、糖和磷酸糖,、生物胺和脂質(zhì)等)的種類、數(shù)量及變化規(guī)律的科學(xué),,是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分,。其中GC-MS非靶向代謝組學(xué)是對生物體內(nèi)源性代謝物進(jìn)行系統(tǒng)全方面的分析平臺。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)因?yàn)槠漭^為成熟,、分辨率高,、靈敏度高、重現(xiàn)性好,,擁有大量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫的特點(diǎn),,被大量地運(yùn)用在植物、動物,、微生物的研究中,。隨著信息科學(xué)和分析技術(shù)的發(fā)展,運(yùn)用GC-MS非靶向代謝組學(xué)研究疾病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)藥物靶點(diǎn)的方法日趨成熟,,其重要性也日益凸顯,。GC-MS非靶向代謝組學(xué)也在代謝性疾病等藥物靶點(diǎn)、疾病機(jī)制研究和藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)中提供重要參考和啟示,。湖北LC-MS/MS非靶向代謝組學(xué)定性分析