蛋白組究竟研究原因:首先,,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達(dá)量與實(shí)際對應(yīng)蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應(yīng)蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,,經(jīng)過平均后r值只為0.4。蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)目前在一小部分]應(yīng)用中具有獨(dú)特優(yōu)勢,。蛋白組究竟研究的是什么呢,?第1,蛋白質(zhì)定性,,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當(dāng)中,;第2,蛋白質(zhì)定量,,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量),;第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,,這些修飾主要包括磷酸化,,泛素化,糖基化,,乙?;鹊?,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。蛋白質(zhì)組學(xué)研究對提高我國生物醫(yī)學(xué)原始創(chuàng)新能力,、重大疾病防診治能力發(fā)展具有重大的戰(zhàn)略意義,。南京TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)
什么樣本能做蛋白組學(xué)檢測?大概可以測到多少的蛋白種類,?原則上只要能提取到蛋白,,就可以做蛋白組檢測。樣本測到的蛋白種類跟數(shù)據(jù)庫和樣本本身蛋白濃度有關(guān),,一般數(shù)據(jù)庫越大,,可以鑒定到的蛋白質(zhì)數(shù)量越多。也與樣本的類型有關(guān),,通常,,組織細(xì)胞相比于體液樣本,能夠鑒定到更多的蛋白,。蛋白組學(xué)樣本寄送前是否需要精確計(jì)數(shù)或是稱量?不同樣本寄送會有不同的送樣要求,,按照收集方法提供可以保證實(shí)驗(yàn)用量充足,。不需要精確計(jì)數(shù)或是稱量,項(xiàng)目開展前會進(jìn)行蛋白濃度的測定,,后續(xù)也是不同樣本等蛋白量處理,、上機(jī)檢測,但是要保證每個樣本的寄樣量達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求,。四川PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測價(jià)格蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),,就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。
DIA 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)優(yōu)點(diǎn):采集所有離子及碎片圖譜,,重現(xiàn)性好,。基于碎片離子定量,,選擇性好,,可媲美 SPM/MRM。循環(huán)時(shí)間固定,,掃描點(diǎn)數(shù)均勻,,定量準(zhǔn)確度高。高通量,,能同時(shí)監(jiān)測所有目標(biāo)蛋白,。PRM 靶向定量蛋白組:平行反應(yīng)監(jiān)測(PRM)是一種靶向檢測方法,能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白,、目標(biāo)肽段進(jìn)行選擇性檢測,,從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)蛋白/肽段進(jìn)行相對定量。技術(shù)優(yōu)點(diǎn):不依賴抗體;特異性,;結(jié)果準(zhǔn)確,、可靠;高通量,。修飾蛋白質(zhì)組學(xué):利用 LC-MS/MS 結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索的方法,,在搜庫時(shí)設(shè)置修飾搜庫參數(shù),實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)所有已知的修飾位點(diǎn)磷酸化,、乙?;⑻腔头核鼗M(jìn)行鑒定,。
蛋白質(zhì)組研究內(nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合Western等技術(shù),,利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,,糖基化,,酶原刺激等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用,。基-受體結(jié)合分析,??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解,。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的首要任務(wù)是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī),、可靠、有效的技術(shù),。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的,?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,設(shè)計(jì)和建立針對這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,,然后對待測樣品進(jìn)行PRM數(shù)據(jù)采集,,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進(jìn)行定量。另外,,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,,用PRM額外做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可實(shí)現(xiàn)一定的定量,。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面,?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實(shí)現(xiàn)。具體說來,,比如驗(yàn)證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,,多肽的相對和一定的定量,,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點(diǎn)的定量,,想同時(shí)定量多個蛋白的情況等,,都可以用PRM來做。DIA 定量蛋白質(zhì)組學(xué)可以采集所有離子及碎片圖譜,,重現(xiàn)性好,。北京TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定
蛋白質(zhì)組學(xué)研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益,。南京TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)
蛋白質(zhì)組學(xué)常用技術(shù):非靶向蛋白組學(xué):蛋白質(zhì)定性(膠條鑒定和溶液鑒定),,高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),,多肽組學(xué),。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物,、真核微生物,、植物和動物等范圍。蛋白質(zhì)組學(xué)主要以全蛋白組(組織,、細(xì)胞),、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,,通過對蛋白組進(jìn)行定性、定量,、分子功能分析,、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學(xué)功能,、作用機(jī)制,、疾病診斷的標(biāo)志物以及預(yù)測蛋白的上、下游變化關(guān)系,。蛋白質(zhì)組學(xué)可以克服核酸水平預(yù)測的不確定性,、反映核酸翻譯后修飾情況。南京TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)