泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進(jìn)行富集,,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量,。技術(shù)優(yōu)勢:1,、高特異性的修飾類泛抗體;2,、高分辨率,、高靈敏度質(zhì)譜儀;應(yīng)用領(lǐng)域:泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期,、增殖,、細(xì)胞凋亡、分化,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),、信號傳遞,、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控,。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān),。因此,作為近年來生物化學(xué)研究的一個重大成果,,它已然成為研究,、開發(fā)新藥物的新靶點。乙?;揎椀鞍捉M學(xué)應(yīng)用方向有什么,?廣州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)
蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):乙?;揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,,對細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用,。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié),。乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,,再結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解,。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,,調(diào)控包括細(xì)胞周期,、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動,。濟(jì)南蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)一般流程蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,,蛋白會首先被酶切成肽段,,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)介紹: 蛋白質(zhì)泛素化修飾(Ubiquitylation)是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,,是指一個或多個泛素分子(Ubiquitin,,由76個氨基酸組成的多肽)在一系列特殊的酶作用下,將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類,,從中選出靶蛋白分子,,并對靶蛋白進(jìn)行特異性修飾的過程。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,,泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物80%~85%的蛋白質(zhì)降解,。除參與蛋白質(zhì)降解之外,泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期,、增殖,、細(xì)胞凋亡、分化,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),、信號傳遞,、損傷修復(fù),、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控,。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (Protein translational modifications,,PTMs) 通過功能基團(tuán)或蛋白質(zhì)的共價添加、調(diào)節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質(zhì)的降解來增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,。這些修飾包括磷酸化,、糖基化、泛素化,、亞硝基化,、甲基化、乙?;?、脂質(zhì)化和蛋白水解,幾乎影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)制的所有方面,。因此,,識別和理解 PTM 在細(xì)胞生物學(xué)和疾病療理和預(yù)防的研究中至關(guān)重要。蛋白質(zhì)翻譯后修飾 (PTMs) 進(jìn)一步促進(jìn)了從基因組水平到蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的增加,。PTMs 是一種化學(xué)修飾,,在功能蛋白質(zhì)組中發(fā)揮關(guān)鍵作用,因為它們調(diào)節(jié)活性,、定位以及與其他細(xì)胞分子(如蛋白質(zhì),、核酸、脂質(zhì)和輔助因子)的相互作用,。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計量和豐度存在,,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時對其的檢測。
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后的化學(xué)修飾過程,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質(zhì)添加磷酸酯,、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團(tuán)增加蛋白質(zhì)組的功能多樣性,,并影響正常細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理的幾乎所有方面,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過程中起著關(guān)鍵作用,如細(xì)胞分化,、蛋白質(zhì)降解,、信號傳導(dǎo)和調(diào)節(jié)過程、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及蛋白質(zhì)相互作用,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化,、糖基化、泛素化,、亞硝基化,、甲基化,、乙酰化,、脂質(zhì)化和蛋白水解,。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細(xì)胞生物學(xué)以及疾病診斷和預(yù)防研究中至關(guān)重要,。目前對乙?;揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控,以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面,。貴州蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)方法
蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過程極其復(fù)雜,。廣州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)怎么確定位點?蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素(lectin)富集N-糖基化肽段,,然后用N-糖酰胺酶(PNGase)在H218O中切除連接在天冬酰胺殘基(Asn)上的糖鏈,。該處理致使Asn分子量增加2.9890Da。之后用高精度LC-MS質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段,,并通過MASCOT軟件檢索數(shù)據(jù)庫,,確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列,從而確定該蛋白質(zhì)的N-糖基化位點,。琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,,富集效率好,。廣州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)