蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學定量分析：1. SILAC細胞標記,，組織/細胞破碎,，提取、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙?；揎椊M學定量）,。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記（基于iTRAQ的乙?；揎椊M學定量）,。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?；揎楇亩芜M行免疫富集,。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙酰化肽段進行序列分析,。6. 數(shù)據(jù)分析,，比對不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異,，并對產(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋,。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點：能夠特異鑒定單個磷酸化位點。廣東甲基化修飾蛋白質(zhì)組學

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測方法：質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一,，可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾（post-translational modifications，PTMs）,，如磷酸化,、乙酰化,、泛素化,、SUMO化、糖基化等,，大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復雜性,。檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾，了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對遺傳學和表觀遺傳學的理解,。目標蛋白的PTMs研究通常需要一個富集步驟，因為修飾蛋白的豐度一般較低,。大多數(shù)PTMs檢測方法都是結(jié)合富集策略開發(fā)的,，以比較好的識別、驗證和研究目標蛋白中PTMs的功能,。廣州亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學領(lǐng)域蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性,。

蛋白翻譯后修飾組學技術(shù)在準確醫(yī)學中的應用：盡管目前大數(shù)據(jù)的獲得會采用基因組學和轉(zhuǎn)錄組學，但是關(guān)鍵的發(fā)現(xiàn)還是依賴蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)而得到的,。近來越來越多的研究表明蛋白組學驅(qū)動的準確的醫(yī)學具有極大的實用性和普適性,，蛋白組學的研究更加速了臨床轉(zhuǎn)化的進程,。蛋白翻譯后修飾（post-ranslational modification, PTM)賦予了蛋白種類的豐富性及蛋白功能的多樣化，研究蛋白翻譯后修飾不只可以確定蛋白修飾（磷酸化,、泛素化,、酰化,、甲基化,、SUMO化等）或蛋白酶裂解的新位點，還可以發(fā)現(xiàn)生物標記物及探索藥物/化學調(diào)節(jié)物的作用機制,。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學技術(shù)優(yōu)點：1,、全方面性：磷酸化蛋白質(zhì)組學以整個細胞蛋白為研究對象，研究內(nèi)容包括了細胞內(nèi)具有生命功能的蛋白,，如細胞增生,、細胞分裂和細胞分化等相關(guān)蛋白，因而研究更為全方面,。2,、可靠性：傳統(tǒng)的生物學研究蛋白質(zhì)磷酸化往往針對特定條件，以兩個蛋白或更多蛋白之間的相互作用為出發(fā)點,，具有局限性,，缺乏整體認識。磷酸化蛋白質(zhì)組學則可檢測不同蛋白激酶及磷酸化酶對同一個蛋白磷酸化程度的影響,，因而結(jié)果具有普遍性和可靠性,。3、有效性：磷酸化蛋白質(zhì)組學反映的是細胞內(nèi)真實發(fā)生的事件,，在一次試驗中考慮了不同變量,，克服了生物學中逐步添加變量的缺陷。4,、探索性：磷酸化蛋白質(zhì)組學以細胞內(nèi)蛋白為研究對象,，相對于傳統(tǒng)的生物學研究以及蛋白質(zhì)芯片，更易發(fā)現(xiàn)未知的新磷酸化位點和磷酸化蛋白質(zhì),。如果可以聯(lián)合生物學技術(shù),，則可以發(fā)現(xiàn)具有磷酸化或者去磷酸化功能的酶。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,，蛋白會首先被酶切成肽段,，然后進入質(zhì)譜進行分析。

翻譯后修飾蛋白組學分析：在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,，蛋白會首先被酶切成肽段,，然后進入質(zhì)譜進行分析。通過質(zhì)譜分析,，得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息,。對于某一個特定肽段而言,，在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下，其序列信息和分子量是確定的,。當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,，例如磷酸化修飾，由于序列信息和分子量是確定的,，磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,，假設(shè)這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,，再通過二級質(zhì)譜圖進行二次確認。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,。廣州亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學領(lǐng)域

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的定位,。廣東甲基化修飾蛋白質(zhì)組學

蛋白質(zhì)泛素化修飾組學技術(shù)：泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解,。此外,，泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位，調(diào)控包括細胞周期,、細胞凋亡,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內(nèi)的多種細胞活動,。樣品要求：1,、SDS-PAGE條帶：5個以上可見考染條帶。2,、溶液（目標蛋白質(zhì)）：目標蛋白總量>50μg,，目標蛋白濃度>80%。3,、溶液（大規(guī)?；旌系鞍踪|(zhì)）：蛋白總量>1mg，蛋白濃度>1μg/μl,。廣東甲基化修飾蛋白質(zhì)組學

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