質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾：相對于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù),，質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行分析,，且可以對常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進(jìn)行補(bǔ)充,。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法,。但是自下而上的質(zhì)譜方法無法保證可以完全識別目的蛋白的特定翻譯后修飾，因?yàn)橘|(zhì)譜是通過蛋白質(zhì)序列內(nèi)的多個肽段來鑒定的,，這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識別的機(jī)會,。一種提高質(zhì)譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進(jìn)行肽段富集，而不是使用PTM親和試劑進(jìn)行蛋白富集,，這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量,。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)：血漿蛋白糖基化修飾分析：蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,，是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,。分泌的細(xì)胞外蛋白常被糖基化，糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白,。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機(jī)體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機(jī)體分泌,、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),，其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì),。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性,、運(yùn)輸和定位,，而且在分子識別、細(xì)胞通信,、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,。因此對血漿蛋白糖基化進(jìn)行分析,，有助于研究血漿蛋白的生理功能等,。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變，通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量,。

蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)定量分析：1. SILAC細(xì)胞標(biāo)記，組織/細(xì)胞破碎,，提取,、提純目的蛋白質(zhì)（基于SILAC的乙酰化修飾組學(xué)定量）。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段,。3. 對多肽片段進(jìn)行iTRAQ標(biāo)記（基于iTRAQ的乙?；揎椊M學(xué)定量）。4. 使用高效特異性乙?；贵w對乙?；揎楇亩芜M(jìn)行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?；亩芜M(jìn)行序列分析,。6. 數(shù)據(jù)分析，比對不同樣本中蛋白乙?；揎椝讲町?，并對產(chǎn)生變化的生物學(xué)意義進(jìn)行解釋。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時應(yīng)該注意些什么問題,？覆蓋率：覆蓋率越高,，檢測和鑒定含有修飾基團(tuán)的肽幾率就越大。修飾位點(diǎn)的占有率：被修飾的蛋白質(zhì)的百分比低,，則檢測到修飾肽的機(jī)會會隨之減少。如果百分比較高（> 30％）,，則有助于識別修飾位點(diǎn),。棕櫚酰化蛋白修飾質(zhì)譜鑒定方法：S-棕櫚?；闹饕δ苁谴龠M(jìn)蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)合,。蛋白質(zhì)可以由一個棕櫚酰基組成,，也可以與更多棕櫚基或與其他脂質(zhì),，如豆蔻酰基,。由于對S-棕櫚?；鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性，由于S-棕櫚?；揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質(zhì)鏈的S-脂酰化肽?，F(xiàn)在常用的幾種方法可以捕獲S-脂?；鞍滓约皩δ繕?biāo)修飾蛋白進(jìn)行捕獲。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾,。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)：磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的,。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,。在哺乳動物的細(xì)胞生命周期中，至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾,。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和細(xì)胞代謝過程,，且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關(guān)。因此,，對磷酸化蛋白質(zhì)組進(jìn)行定量研究,，尋找差異表達(dá)的磷酸化蛋白質(zhì),，有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標(biāo)志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標(biāo),。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價修飾方式之一,。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細(xì)胞過程的重要方式，幾乎在每個細(xì)胞過程中都是不可或缺的,。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時對其的檢測,。因此,，要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,，純化方法是必要的,，以分離修飾蛋白和肽段,，然后再進(jìn)行后續(xù)分析,。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,，可以對翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究,。湖北亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜鑒定

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