蛋白質(zhì)組研究內(nèi)容:1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合Western等技術(shù),,利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定研究。2.翻譯后修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,,糖基化,酶原刺激等,。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用,?;?受體結(jié)合分析??梢岳没蚯贸头戳x技術(shù)分析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能,。另外對蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質(zhì)組比較分析,,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質(zhì)分子”,。南京PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)項(xiàng)目
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù),,首先利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力,,用Q1選擇目標(biāo)肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進(jìn)行碎裂,,然后利用Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息,。這樣能夠?qū)δ繕?biāo)蛋白質(zhì)、目標(biāo)肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進(jìn)行選擇性檢測,,即可對目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行相對(一定)定量,。從而實(shí)現(xiàn)對復(fù)雜樣本中的目標(biāo)蛋白質(zhì)/肽段進(jìn)行準(zhǔn)確地特異性分析。四川常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析蛋白組學(xué)樣本寄送前是否需要精確計(jì)數(shù)或是稱量,?
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué):產(chǎn)品分類:a.相對定量(目的同WB),。b.一定定量(目的同Elisa)。技術(shù)優(yōu)勢:(1)無需抗體,,可直接對樣本中目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析,。(2)高特異性、準(zhǔn)確度和靈敏度,,靶向檢測目標(biāo)蛋白對應(yīng)的多個unique肽段,。(3)通量高,可以同時實(shí)現(xiàn)幾十個蛋白的定量檢測,。樣本要求:動物及臨床組織標(biāo)本100mg/sample,,血清、血漿200μL/sample,,細(xì)胞,、微生物1×107cells/sample。應(yīng)用方向:驗(yàn)證修飾和非修飾定量蛋白組學(xué)結(jié)果,;目標(biāo)蛋白相對定量和一定定量分析,。蛋白質(zhì)組學(xué)屬于后基因組時代的科學(xué)研究,針對基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測與定量。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程是怎樣的,?要做PRM首先要明確目標(biāo)蛋白(或多肽)是什么,,設(shè)計(jì)和建立針對這些目標(biāo)蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進(jìn)行PRM數(shù)據(jù)采集,,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件提取子離子信息進(jìn)行定量,。另外,如果配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)肽段,,用PRM額外做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線,,即可實(shí)現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能應(yīng)用到哪些方面,?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實(shí)現(xiàn),。具體說來,比如驗(yàn)證定量蛋白質(zhì)組學(xué)中某些蛋白的變化,,多肽的相對和一定的定量,,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點(diǎn)的定量,,想同時定量多個蛋白的情況等,,都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有生物質(zhì)譜,。
常規(guī)蛋白質(zhì)組學(xué):Labelfree多肽組學(xué):顧名思義,就是不使用任何標(biāo)記方法,,直接對肽段進(jìn)行質(zhì)譜鑒定和定性定量分析,。實(shí)驗(yàn)流程簡單,只需要對蛋白進(jìn)行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機(jī),。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計(jì)數(shù)(Spectralcount),,常用的是峰面積。不過,,由于質(zhì)譜采集時只選取topN的母離子進(jìn)行二級碎裂和MS2檢測,,所以會丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多,。TMT/iTRAQ標(biāo)記定量蛋白組學(xué):TMT全稱是TandemMassTag,,是經(jīng)典化學(xué)標(biāo)記試劑,普遍用于差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析研究中,。該技術(shù)采用6重,、10重或16重同位素標(biāo)簽,與肽段的氨基發(fā)生共價結(jié)合反應(yīng),,可實(shí)現(xiàn)同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析,。(目前16標(biāo)鹿明生物可提供技術(shù)服務(wù))。蛋白質(zhì)組學(xué)由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細(xì)胞代謝等過程的整體而全方面的認(rèn)識,。南京PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)項(xiàng)目
蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一,。南京PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)項(xiàng)目
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組研究的重要內(nèi)容,通過對基因表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的定量分析,,以了解基因在不同的生理,、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。近年來,,隨著非凝膠技術(shù)的發(fā)展,,蛋白質(zhì)組學(xué)(“Shotgun”proteomics)技術(shù),特別是多維蛋白質(zhì)鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,,MudPIT)已成為研究復(fù)雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)和定性和定量分析的強(qiáng)有力工具,。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成,、定位,、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。南京PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)項(xiàng)目
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