細胞免疫熒光簡單實驗步驟如下：1. 漂洗血清蛋白H7、2-7,、4 37度 PBS 2小時,。2. -20度甲醇固定20分鐘后,自然、干燥 10分鐘,。3. PBS洗凈：3min×3,。4. 1%Triton：25 min~30 min、配成50 ultriton+5 mlpBS,。5. PBS洗凈：2×5 min,。6. 羊血清封閉：37度，20分鐘,。7. 一抗,，4度過夜，一般要大于18小時或者37度,，1-2小時,。8. 4度PBS洗凈，3 min×5次,。9. 二抗37度小于一小時,。10. 37度 PBS洗凈，3×5 min,。11. 涼干封片（封閉液PH8.5）,；不管采用何種方法，在使用PBS緩沖液漂洗時,，都要漂洗干凈并且要測下pH值,，可以使用PBS多清洗幾次，也可以延長PBS清洗時間,，如果結(jié)果背景較高可以延長漂洗的次數(shù)和時,。免疫熒光在醫(yī)學(xué)診斷中起著重要作用，可以用于檢測病原體,、肉瘤標志物等,。MBP免疫熒光

免疫熒光檢測相對于酶檢測的優(yōu)勢：定量熒光信號的能力（與使用基于酶的方法進行的定性測定相反）；復(fù)用能力（可以結(jié)合不同發(fā)射光譜的熒光染料來檢測多種蛋白質(zhì)）,；熒光染料的光穩(wěn)定性,。免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,，制成熒光抗體,，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標記的熒光素,，利用熒光顯微鏡觀察標本,，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色）,，可以看見熒光所在的組織細胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì),、定位,，以及利用定量技術(shù)測定含量。CTNT免疫熒光試驗免疫熒光技術(shù)可以用于研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的亞細胞定位,。

免疫熒光實驗步驟：1.樣本準備：細胞或薄組織,。對單層生長細胞，在傳代培養(yǎng)時,，將細胞接種到預(yù)先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次,；對懸浮生長細胞,，取對數(shù)生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次,，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片,。2.固定：取適當?shù)墓潭▌┕潭颖尽Ｒ话阌?%PFA固定4℃過夜,。固定完畢后的樣本可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月,。3.洗滌：PBS洗滌5min*3次。4.打孔：選擇合適的通透劑處理樣本,，目的是使抗體更容易進入細胞與抗原結(jié)合,。

細胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的，他是一種抗原抗體反應(yīng),，好像對我們來說他顯得很遙遠的樣子,，因為我們并不了解他能做什么，通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì),、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù),。細胞免疫熒光，這對很多人來說都是一次聽說這個東西,，也不知道他對我們會有什么好處與壞處,，科學(xué)研究就是這樣子的，普通老百姓是不會明白其中的道理的,，但是這些研究也是確實的在我們的生活中取得了成果,，能夠讓大家過的更加舒適,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究動物模型和藥物篩選,。

熒光效率：熒光分子不會將全部吸收的光能都轉(zhuǎn)變成熒光，總或多或少地以其他形式釋放,。熒光效率是指熒光分子將吸收的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率,，與發(fā)射熒光光量子的數(shù)值成正比,。熒光效率＝發(fā)射熒光的光量分子數(shù)（熒光強度）／吸收光的光量子數(shù)（激發(fā)光強度）。發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強度,，除受激發(fā)光強度影響外,，也與激發(fā)光的波長有關(guān)。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜（熒光光譜）,，即在某一特定波長處有較大吸收峰和較大發(fā)射峰,。選擇激發(fā)光波長量接近于熒光分子的較大吸收峰波長，且測定光波量接近于較大發(fā)射光波峰時,，得到的熒光強度也較大,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細胞分裂和細胞周期。CK19免疫熒光染色

免疫熒光技術(shù)可以用于研究肉瘤的發(fā)生和發(fā)展過程,。MBP免疫熒光

免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng),。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時,，只要知道其中的一個因素,，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上,，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后,，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。在此基礎(chǔ)上又分為兩種方法：直接法和間接法,。直接法：將標記的特異性熒光抗體直接加到抗原上,，經(jīng)過一定時間反應(yīng)，即可結(jié)合并顯色,。間接法：先用抗原的抗體（一抗）與抗原反應(yīng)結(jié)合,，再用熒光標記的二抗（一抗的抗體）與抗原反應(yīng)，形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物,。MBP免疫熒光

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