細(xì)胞和組織樣品處理：準(zhǔn)備熒光標(biāo)記的細(xì)胞樣品：為實(shí)現(xiàn)較佳的圖像質(zhì)量,，首先應(yīng)建立針對(duì)目的蛋白和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的研究，同時(shí)將其他一切背景等排除在圖像之外,。固定和破膜細(xì)胞樣品用于標(biāo)記–首先將細(xì)胞結(jié)構(gòu),、蛋白和核酸固定，然后使熒光染料和抗體滲入到細(xì)胞內(nèi)部,，標(biāo)記目的靶點(diǎn),。封閉細(xì)胞樣品，防止熒光標(biāo)記物與研究無(wú)關(guān)的蛋白非特異性結(jié)合,，較大限度提高信噪比,。蛋白封閉液有助于減少非特異染色?？贵w能夠取代封閉蛋白與其表位形成高親和力結(jié)合,，而封閉液可防止樣品中的低親和力結(jié)合。免疫熒光技術(shù)在生物學(xué)研究,、醫(yī)學(xué)診斷和藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域具有普遍應(yīng)用,。ALBUMIN免疫熒光IF

細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：根據(jù)所檢測(cè)抗原所在位置來(lái)確認(rèn)是否需要加入 Triton 進(jìn)行通透。若所檢測(cè)抗原表位位于膜蛋白的白外段,，則不需要通透；一般 5% BSA 封閉即可達(dá)到效果,；從加熒光二抗起,，后面所有操作步驟盡量避光?？s短在熒光顯微鏡下的觀察時(shí)間,，1~2 h 為宜。染色后盡快熒光顯微鏡下觀察,，若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周,。無(wú)/弱染色：烤片溫度過(guò)高，推薦 56~60 ℃ 1~2 h,；一抗是否適用固定液和石蠟切片,，使用濃度是否過(guò)低，孵育是否時(shí)間過(guò)短等,。GFAP免疫組化IHC在1941年,，Coons初次成功地使用熒光素作為標(biāo)記物質(zhì)進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)。

熒光抗體技術(shù)：抗原抗體反應(yīng)后,，利用熒光顯微鏡判定結(jié)果的檢測(cè)方法,。免疫熒光測(cè)定：抗原抗體反應(yīng)后，利用特殊儀器測(cè)定熒光強(qiáng)度而推算被測(cè)物濃度的檢測(cè)方法,。免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：直接法測(cè)抗原：基本原理：將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上,，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng),。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高,，非特異性熒光染色少,。缺點(diǎn)是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體,。此法常用于細(xì)菌,、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查,。

細(xì)胞免疫熒光步驟是什么呢,？步驟：1. 細(xì)胞一定要貼在玻片上（較好可以放入24孔板），為后面照像打基礎(chǔ),。細(xì)胞密度適中,，大約60-75%滿(mǎn)片即可，否則容易脫片,。2. 取出細(xì)胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,，現(xiàn)用現(xiàn)配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3. PBS沖洗,；4. 0.1%Triton作用20分鐘,；5. PBS沖洗；6. 10%正常血清封閉10分鐘,；7. 加入一抗,，4度孵育過(guò)夜（找個(gè)小瓶蓋將小玻片支起來(lái)，抗體就不容易溢出）,，還要記住“砸片”,，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻,?？贵w稀釋度1：60，較常用,！8. PBS沖洗4次,，各5分鐘；9加入熒光二抗,，室溫30分鐘,。抗體稀釋度1：400,，較常用,！10. 90%甘油封片。也很關(guān)鍵阿,，多封幾次才有體會(huì),。12. 避光保存,，或到顯微鏡下觀察。免疫熒光技術(shù)可以用于研究心血管系統(tǒng)的疾病和醫(yī)治,。

免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：1.樣本準(zhǔn)備：細(xì)胞或薄組織,。對(duì)單層生長(zhǎng)細(xì)胞，在傳代培養(yǎng)時(shí),，將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過(guò)的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,，待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次,；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)細(xì)胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次,，用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片,。2.固定：取適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭颖尽Ｒ话阌?%PFA固定4℃過(guò)夜,。固定完畢后的樣本可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個(gè)月,。3.洗滌：PBS洗滌5min*3次。4.打孔：選擇合適的通透劑處理樣本,，目的是使抗體更容易進(jìn)入細(xì)胞與抗原結(jié)合,。免疫熒光技術(shù)在免疫學(xué)研究中發(fā)揮重要作用，幫助揭示細(xì)胞和分子的功能和相互關(guān)系,。AKT免疫組化IHC

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位,。ALBUMIN免疫熒光IF

細(xì)胞免疫熒光簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)步驟如下：1. 漂洗血清蛋白H7、2-7,、4 37度 PBS 2小時(shí)。2. -20度甲醇固定20分鐘后,自然,、干燥 10分鐘,。3. PBS洗凈：3min×3。4. 1%Triton：25 min~30 min,、配成50 ultriton+5 mlpBS,。5. PBS洗凈：2×5 min。6. 羊血清封閉：37度,，20分鐘,。7. 一抗，4度過(guò)夜,，一般要大于18小時(shí)或者37度,，1-2小時(shí)。8. 4度PBS洗凈,，3 min×5次,。9. 二抗37度小于一小時(shí),。10. 37度 PBS洗凈，3×5 min,。11. 涼干封片（封閉液PH8.5）,；不管采用何種方法，在使用PBS緩沖液漂洗時(shí),，都要漂洗干凈并且要測(cè)下pH值,，可以使用PBS多清洗幾次，也可以延長(zhǎng)PBS清洗時(shí)間,，如果結(jié)果背景較高可以延長(zhǎng)漂洗的次數(shù)和時(shí),。ALBUMIN免疫熒光IF

上海睿寶和生物科技有限公司屬于商務(wù)服務(wù)的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚,。公司是一家私營(yíng)有限責(zé)任公司企業(yè),，以誠(chéng)信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神、專(zhuān)業(yè)的管理團(tuán)隊(duì),、踏實(shí)的職工隊(duì)伍,，努力為廣大用戶(hù)提供***的產(chǎn)品。公司擁有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),，具有病理檢測(cè)服務(wù),，免疫組化檢測(cè)服務(wù)，分子檢測(cè)服務(wù),，全景掃描服務(wù)等多項(xiàng)業(yè)務(wù),。睿寶和生物自成立以來(lái)，一直堅(jiān)持走正規(guī)化,、專(zhuān)業(yè)化路線,，得到了廣大客戶(hù)及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持。