免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng),。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時(shí),，只要知道其中的一個(gè)因素,，就可以查出另一個(gè)因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上,，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后,，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。在此基礎(chǔ)上又分為兩種方法：直接法和間接法,。直接法：將標(biāo)記的特異性熒光抗體直接加到抗原上,，經(jīng)過一定時(shí)間反應(yīng)，即可結(jié)合并顯色,。間接法：先用抗原的抗體（一抗）與抗原反應(yīng)結(jié)合,，再用熒光標(biāo)記的二抗（一抗的抗體）與抗原反應(yīng)，形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究疾病的發(fā)生機(jī)制和醫(yī)治效果評估,。SERPINF1免疫檢測

免疫熒光-實(shí)驗(yàn)步驟：細(xì)胞爬片免疫熒光：在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;（圓蓋片：13mm24孔；18mm12孔,；20mm6孔）用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室溫通透20min(細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA（PBS配置）,室溫封閉30min5,吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量用PBS稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜,。加熒光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中室溫孵育50min。SERPINF1免疫檢測免疫熒光技術(shù)可以用于研究肉瘤的發(fā)生和發(fā)展過程,。

細(xì)胞免疫熒光步驟是什么呢,？步驟：1. 細(xì)胞一定要貼在玻片上（較好可以放入24孔板），為后面照像打基礎(chǔ),。細(xì)胞密度適中,，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片,。2. 取出細(xì)胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,，現(xiàn)用現(xiàn)配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3. PBS沖洗,；4. 0.1%Triton作用20分鐘,；5. PBS沖洗；6. 10%正常血清封閉10分鐘,；7. 加入一抗,，4度孵育過夜（找個(gè)小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出），還要記住“砸片”,，就是抗體從較高處落到片子上,，以分布均勻?？贵w稀釋度1：60,，較常用！8. PBS沖洗4次,，各5分鐘,；9加入熒光二抗，室溫30分鐘,?？贵w稀釋度1：400，較常用,！10. 90%甘油封片,。也很關(guān)鍵阿，多封幾次才有體會,。12. 避光保存,，或到顯微鏡下觀察。

免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用范圍極其普遍,，可以測定內(nèi)分泌,、蛋白質(zhì)、多肽,、核酸,、神經(jīng)遞質(zhì)、受體,、細(xì)胞因子,、細(xì)胞表面抗原、肉瘤標(biāo)志物,、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì),。根據(jù)診斷類別，又可分為傳染性疾病,、內(nèi)分泌,、藥物檢測、免疫學(xué),、血型鑒定等。許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,，但并非都可用作熒光色素,。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑,。分子量為389.4,，較大吸收光波長為490495nm，較大發(fā)射光波長520530nm,，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究遺傳疾病和基因表達(dá)調(diào)控。

熒光抗體技術(shù)：抗原抗體反應(yīng)后,，利用熒光顯微鏡判定結(jié)果的檢測方法,。免疫熒光測定：抗原抗體反應(yīng)后，利用特殊儀器測定熒光強(qiáng)度而推算被測物濃度的檢測方法,。免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：直接法測抗原：基本原理：將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上,，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡便,、特異性高,，非特異性熒光染色少。缺點(diǎn)是敏感性偏低,；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體,。此法常用于細(xì)菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢,、皮膚活檢的免疫病理檢查,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究內(nèi)臟移植和免疫抑制。ALBUMIN免疫熒光試驗(yàn)

免疫熒光技術(shù)通過熒光信號的觀察來確定抗原或抗體的分布和定位,。SERPINF1免疫檢測

直接免疫熒光：單抗體（一抗）用于免疫染色和檢測目標(biāo)蛋白,。熒光素結(jié)合的一抗直接與目標(biāo)抗原結(jié)合，并使用成像顯微鏡觀察,。直接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn)：由于無需為兩種抗體選擇不同的物種反應(yīng)性,，從而降低了物種交叉反應(yīng)性問題。與間接免疫熒光相比,，時(shí)間縮短（操作步驟減少）,。直接免疫熒光的缺點(diǎn)：不允許通過二抗進(jìn)行信號放大；檢測靈敏度降低,；熒光素結(jié)合一抗的選擇有限,；與使用熒光二抗的檢測相比，更昂貴,。間接免疫熒光：使用兩種抗體（一抗和二抗）進(jìn)行免疫染色并檢測目標(biāo)蛋白,。首先，用特異性一抗標(biāo)記目標(biāo)蛋白,。然后,，熒光素結(jié)合的二抗（與一抗具有不同的物種反應(yīng)性）識別結(jié)合的抗原-抗體復(fù)合物并與一抗結(jié)合,。由于一個(gè)以上的二抗可以與一抗結(jié)合，熒光信號被放大,，提供了更高的檢測靈敏度,。SERPINF1免疫檢測