細胞爬片的免疫熒光步驟基本一致：1. 取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養(yǎng)皿里,，PBS洗三遍,。注意：有的時候作的細胞爬片可能比較小,，因此夾取的時候要小心,，注意 反正面，放在皿里洗比較方便,，避免了來回夾取,，另外洗的時候加PBS不要太沖,，不要細胞沖下來。洗的時候我都是多加PBS,，稍晃一下就倒掉,，沒有等5分鐘或10分鐘。2. 4%冷的多聚甲醛固定20分鐘,，PBS洗三遍,。3. 0.2%Triton X-100通透10分鐘，PBS洗三遍,。4. 與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘,，PBS洗三遍。5. 一抗4度濕盒內(nèi)過夜,，也可37度2小時,，感覺前者效果好，PBS洗三遍,。6. 二抗室溫2小時(避光),，或者37度1半小時，PBS洗三遍,。7. 較好用DAPI染核,，然后直接照熒光片。8. 蒸餾水洗掉PBS,，甘油封片,，指甲油封片子的四周，因為甘油不象樹脂那樣會干,，所以不用指甲油封的話會弄的一塌糊涂,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的定位和表達水平。SIRT7免疫熒光染色

熒光標記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,，成本較低。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,，因此物種交叉反應(yīng)性問題增加,；與直接免疫熒光相比，時間更長（操作步驟更多）。間接免疫熒光的優(yōu)點：通過增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進行信號放大,；與直接免疫熒光相比,，通過信號放大提高檢測靈敏度；熒光標記二抗的選擇普遍,；與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,，成本較低。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,，因此物種交叉反應(yīng)性問題增加,；與直接免疫熒光相比，時間更長（操作步驟更多）,。SIRT7免疫熒光染色免疫熒光技術(shù)可以用于研究疾病的發(fā)生機制和醫(yī)治效果評估,。

細胞免疫熒光實驗注意事項：1、建議細胞直接種孔板,，采用倒置熒光顯微鏡拍照,，這樣可以避免然后挑片時造成劃片或細胞片破損以及然后封片可能造成滑片等結(jié)果；2,、若實驗室只有正置熒光顯微鏡,，則需要將細胞植于細胞爬片。建議直接購買處理過的細胞爬片,；若只有普通細胞爬片,，可以先將爬片于濃酸（濃酸腐蝕性強，注意操作）或 75% 乙醇浸泡過夜,，若用酸浸泡過夜,，第二天先用自來水小心沖洗掉爬片殘留的酸液，若用 75% 乙醇浸泡,，則不需要此步驟,。然后，用洗潔精搓洗爬片,，然后用去離子水清洗爬片,。置于烘箱 80 ℃ 烘干，再將爬片置于超凈臺造紫外消毒后備用,。

免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用范圍極其普遍,，可以測定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì),、多肽,、核酸、神經(jīng)遞質(zhì),、受體,、細胞因子,、細胞表面抗原、肉瘤標志物,、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì),。根據(jù)診斷類別，又可分為傳染性疾病,、內(nèi)分泌,、藥物檢測、免疫學(xué),、血型鑒定等。許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,，但并非都可用作熒光色素,。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,，易溶于水或酒精等溶劑,。分子量為389.4，較大吸收光波長為490495nm,，較大發(fā)射光波長520530nm,，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。免疫熒光技術(shù)通過熒光信號的觀察來確定抗原或抗體的分布和定位,。

免疫熒光Coons等于1941年初次采用熒光素進行標記而獲得成功,。這種以熒光物質(zhì)標記抗體而進行抗原定位的技術(shù)稱為熒光抗體技術(shù)。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法,；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法,。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù)，因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合,，用于檢測或定位各種抗原,，也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，用于檢測或定位抗體,，但是在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用,，所以人們習(xí)慣稱為熒光抗體技術(shù)，或稱為免疫熒光技術(shù),。以熒光抗體方法較常用,。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學(xué)技術(shù)。免疫熒光技術(shù)在生物學(xué)研究,、醫(yī)學(xué)診斷和藥物開發(fā)等領(lǐng)域具有普遍應(yīng)用,。BAX免疫熒光試驗

熒光抗體技術(shù)可用于檢測和定位各種抗原，也可以用于檢測和定位抗體,。SIRT7免疫熒光染色

細胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,，他是一種抗原抗體反應(yīng),，好像對我們來說他顯得很遙遠的樣子，因為我們并不了解他能做什么,，通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì),、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù)。細胞免疫熒光,，這對很多人來說都是一次聽說這個東西,，也不知道他對我們會有什么好處與壞處，科學(xué)研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會明白其中的道理的,，但是這些研究也是確實的在我們的生活中取得了成果，能夠讓大家過的更加舒適,。SIRT7免疫熒光染色