熒光的猝滅：熒光分子的輻射能力在受到激發(fā)光較長時間的照射后會減弱甚至猝滅，這是由于激發(fā)態(tài)分子的電子不能回復到基態(tài),，所吸收的能量無法以熒光的形式發(fā)射,。一些化合物有天然的熒光猝滅作用而被用作猝滅劑，以消除不需用的熒光,。因此熒光物質(zhì)的保存應注意避免光（特別是紫外光）的直接照射和與其他化合物的接觸,。在熒光抗體技術(shù)中常用一些非熒的色素物質(zhì)如亞甲藍、堿性復紅,。伊文思藍或低濃度的過錳酸鉀,、碘溶液等對標本進行得當復染，以減弱非特異性熒光本質(zhì),，使特異熒光更突出顯示,。免疫熒光技術(shù)可以同時檢測多個目標分子，通過不同顏色的熒光染料進行標記,。VWF免疫熒光

熒光素標記抗體的方法：方法及步驟：①抗體的準備：取適量已知球蛋白濃度之溶液,，置入三角燒瓶中，加入生理鹽水及碳酸鹽緩沖液,，使然后蛋白濃度為20mg/ml,，緩沖液容量為總量的1/10，混勻,，將三角燒瓶置冰槽中,，電磁攪拌（速度適當以不起泡沫為宜）5～10min。②熒光素的準備：根據(jù)欲標記的蛋白質(zhì)總量,，按每毫克蛋白加0.01mg熒光素,，用分析天平準確稱所取所需的異硫氰酸熒光素粉末。③結(jié)合（或稱標記）：邊攪拌邊將稱取的熒光色素漸漸加入球蛋白溶液中,，避免將熒光素粘于三角燒瓶壁或攪拌玻棒上（大約5～10min內(nèi)加完）,，加畢后，繼續(xù)攪拌12～18h,。結(jié)合期間應保持蛋白溶液于4℃左右,，故須及時添冰去水；亦可將結(jié)合裝置安放在4℃冰箱或冰庫中,。PCNA免疫熒光檢查免疫熒光技術(shù)可以用于研究神經(jīng)系統(tǒng)的功能和疾病,。

基于熒光成像的技術(shù)對于查詢細胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用。當與免疫化學結(jié)合時,，熒光成像技術(shù)的分析能力增加,，增強了這種技術(shù)在普遍的研究和臨床應用中的實用性，使其成為寶貴的工具,。免疫熒光顯微鏡通過使活細胞成像能夠可視化整個細胞器,，徹底改變了細胞生物學領域。免疫組織化學和免疫細胞化學是結(jié)合抗原抗體結(jié)合能力進行細胞分析的常用熒光成像技術(shù),。免疫熒光（IF）是一種強大的免疫染色技術(shù),，利用顯微鏡觀察與靶蛋白和其他目標分子結(jié)合的熒光素標記抗體。免疫熒光用于鑒定細胞中的細胞和組織特異性抗原,；可視化蛋白質(zhì)的存在與否,、細胞定位和活化狀態(tài)；并分析免疫反應,。

細胞和組織樣品處理：準備熒光標記的細胞樣品：為實現(xiàn)較佳的圖像質(zhì)量,，首先應建立針對目的蛋白和細胞結(jié)構(gòu)的研究，同時將其他一切背景等排除在圖像之外,。固定和破膜細胞樣品用于標記–首先將細胞結(jié)構(gòu),、蛋白和核酸固定，然后使熒光染料和抗體滲入到細胞內(nèi)部,，標記目的靶點,。封閉細胞樣品，防止熒光標記物與研究無關的蛋白非特異性結(jié)合,，較大限度提高信噪比,。蛋白封閉液有助于減少非特異染色?？贵w能夠取代封閉蛋白與其表位形成高親和力結(jié)合,，而封閉液可防止樣品中的低親和力結(jié)合。免疫熒光技術(shù)在免疫學研究中發(fā)揮重要作用，幫助揭示細胞和分子的功能和相互關系,。

細胞免疫熒光步驟是什么呢,？步驟：1. 細胞一定要貼在玻片上（較好可以放入24孔板），為后面照像打基礎,。細胞密度適中,，大約60-75%滿片即可，否則容易脫片,。2. 取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,，現(xiàn)用現(xiàn)配。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3. PBS沖洗,；4. 0.1%Triton作用20分鐘,；5. PBS沖洗；6. 10%正常血清封閉10分鐘,；7. 加入一抗,，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來，抗體就不容易溢出）,，還要記住“砸片”,，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻,?？贵w稀釋度1：60，較常用,！8. PBS沖洗4次,，各5分鐘；9加入熒光二抗,，室溫30分鐘,。抗體稀釋度1：400,，較常用,！10. 90%甘油封片。也很關鍵阿,，多封幾次才有體會,。12. 避光保存，或到顯微鏡下觀察,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細胞遷移和細胞黏附,。MAP2免疫

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細胞內(nèi)分子的相互作用。VWF免疫熒光

細胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,，他是一種抗原抗體反應,，好像對我們來說他顯得很遙遠的樣子,，因為我們并不了解他能做什么，通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì),、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù),。細胞免疫熒光，這對很多人來說都是一次聽說這個東西,，也不知道他對我們會有什么好處與壞處,，科學研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會明白其中的道理的,，但是這些研究也是確實的在我們的生活中取得了成果，能夠讓大家過的更加舒適,。VWF免疫熒光