免疫熒光實驗步驟：1.樣本準備：細胞或薄組織。對單層生長細胞,，在傳代培養(yǎng)時,，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片,，PBS洗兩次,；對懸浮生長細胞，取對數(shù)生長細胞,，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次,，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。2.固定：取適當?shù)墓潭▌┕潭颖?。一般?%PFA固定4℃過夜,。固定完畢后的樣本可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。3.洗滌：PBS洗滌5min*3次,。4.打孔：選擇合適的通透劑處理樣本,，目的是使抗體更容易進入細胞與抗原結(jié)合。免疫熒光技術可以用于研究動物模型和藥物篩選,。Histone H2A.X免疫熒光染色

免疫熒光應用范圍：其應用范圍極其普遍,，可以測定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì),、細胞因子,、細胞表面抗原、多肽,、核酸,、受體、神經(jīng)遞質(zhì),、肉瘤標志物,、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別,，又可分為傳染性疾病,、內(nèi)分泌、藥物檢測、免疫學,、血型鑒定等,。免疫熒光實驗步驟：洗滌：PBS洗滌5min*3次。封閉：使用封閉液對樣本進行封閉,，一般1h,。加一抗：使用合適濃度的一抗與樣本4℃過夜。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。加二抗：使用間接法時需要加二抗處理,，根據(jù)說明書使用合適的濃度，避光處理1h（后面步驟均需避光）,。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次,。封片：滴一滴防淬滅劑，封片,?？闪⒓从^察后暫存4℃盡快觀察。CD86免疫免疫熒光技術可以用于研究代謝疾病和內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能,。

細胞免疫熒光：細胞種板與細胞爬片制備：1) 細胞密度在90%-95%左右,，用預熱胰酶消化細胞后重懸細胞于完全培養(yǎng)基中，充分吹打,，使之成單細胞懸液,，計數(shù)。2)取細胞培養(yǎng)12孔板,，在每個孔放爬片的位置根據(jù)爬片的大小,，先在每個孔里準備放爬片的位置滴幾滴培養(yǎng)基，然后將爬片置于液滴上,，壓緊,，使爬片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，防止加細胞懸液時爬片漂起,，造成雙層細胞貼片,。根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入12孔板培養(yǎng)板內(nèi)。3)24h或者48h后,，根據(jù)細胞生長速度快慢,，觀察判斷細胞密度，約90%時進行細胞免疫熒光,。

細胞免疫熒光簡單實驗步驟如下：1. 漂洗血清蛋白H7,、2-7、4 37度 PBS 2小時,。2. -20度甲醇固定20分鐘后,自然、干燥 10分鐘。3. PBS洗凈：3min×3,。4. 1%Triton：25 min~30 min,、配成50 ultriton+5 mlpBS。5. PBS洗凈：2×5 min,。6. 羊血清封閉：37度,，20分鐘。7. 一抗,，4度過夜,，一般要大于18小時或者37度，1-2小時,。8. 4度PBS洗凈,，3 min×5次。9. 二抗37度小于一小時,。10. 37度 PBS洗凈,，3×5 min。11. 涼干封片（封閉液PH8.5）,；不管采用何種方法,，在使用PBS緩沖液漂洗時，都要漂洗干凈并且要測下pH值,，可以使用PBS多清洗幾次,，也可以延長PBS清洗時間，如果結(jié)果背景較高可以延長漂洗的次數(shù)和時,。免疫熒光技術可以用于研究心血管系統(tǒng)的疾病和醫(yī)治,。

細胞免疫熒光步驟是什么呢？步驟：1. 細胞一定要貼在玻片上（較好可以放入24孔板）,，為后面照像打基礎,。細胞密度適中，大約60-75%滿片即可,，否則容易脫片,。2. 取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘，現(xiàn)用現(xiàn)配,。（以下各步驟切毋使玻片干燥）3. PBS沖洗,；4. 0.1%Triton作用20分鐘；5. PBS沖洗,；6. 10%正常血清封閉10分鐘,；7. 加入一抗，4度孵育過夜（找個小瓶蓋將小玻片支起來,，抗體就不容易溢出）,，還要記住“砸片”,，就是抗體從較高處落到片子上，以分布均勻,?？贵w稀釋度1：60，較常用,！8. PBS沖洗4次,，各5分鐘；9加入熒光二抗,，室溫30分鐘,。抗體稀釋度1：400,，較常用,！10. 90%甘油封片。也很關鍵阿,，多封幾次才有體會,。12. 避光保存，或到顯微鏡下觀察,。免疫熒光技術可以通過熒光顯微鏡觀察樣品中的熒光信號,，從而確定目標分子的存在和位置。X Hu Nuclei免疫熒光檢查

免疫熒光細胞化學技術用于顯示和檢查細胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì),。Histone H2A.X免疫熒光染色

免疫熒光通過抗體與示蹤物質(zhì)結(jié)合,，利用抗原-抗體結(jié)合反應，進而對抗原所在的細胞或組織進行定性或定量,。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出,，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光，可以看見熒光所在的細胞或組織,，利用定量技術測定含量,，從而可對抗原進行細胞定性和定位分析。細胞免疫熒光用途：快速直觀顯示所檢測蛋白的細胞定位,。材料與儀器：樣品：貼壁細胞,；試劑：4% 組織固定液，PBS,，Triton X-100,，BSA，熒光二抗,，免疫熒光染色二抗稀釋液,，抗熒光猝滅封片液，0.25% 胰酶,；器材：6/12/24 孔板,，細胞爬片（蓋玻片）,，載玻片，15 ml 離心管,。Histone H2A.X免疫熒光染色