基于熒光成像的技術(shù)對于查詢細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用,。當(dāng)與免疫化學(xué)結(jié)合時,，熒光成像技術(shù)的分析能力增加,，增強(qiáng)了這種技術(shù)在普遍的研究和臨床應(yīng)用中的實用性,，使其成為寶貴的工具,。免疫熒光顯微鏡通過使活細(xì)胞成像能夠可視化整個細(xì)胞器,，徹底改變了細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,。免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)是結(jié)合抗原抗體結(jié)合能力進(jìn)行細(xì)胞分析的常用熒光成像技術(shù),。免疫熒光（IF）是一種強(qiáng)大的免疫染色技術(shù),，利用顯微鏡觀察與靶蛋白和其他目標(biāo)分子結(jié)合的熒光素標(biāo)記抗體,。免疫熒光用于鑒定細(xì)胞中的細(xì)胞和組織特異性抗原；可視化蛋白質(zhì)的存在與否,、細(xì)胞定位和活化狀態(tài),；并分析免疫反應(yīng)。免疫熒光技術(shù)是一種以熒光素標(biāo)記抗體來定位抗原物質(zhì)的高度發(fā)達(dá)的標(biāo)記免疫技術(shù),。AR免疫檢測

熒光效率：熒光分子不會將全部吸收的光能都轉(zhuǎn)變成熒光,，總或多或少地以其他形式釋放。熒光效率是指熒光分子將吸收的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率,，與發(fā)射熒光光量子的數(shù)值成正比,。熒光效率＝發(fā)射熒光的光量分子數(shù)（熒光強(qiáng)度）／吸收光的光量子數(shù)（激發(fā)光強(qiáng)度）。發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強(qiáng)度,，除受激發(fā)光強(qiáng)度影響外,，也與激發(fā)光的波長有關(guān)。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜（熒光光譜）,，即在某一特定波長處有較大吸收峰和較大發(fā)射峰,。選擇激發(fā)光波長量接近于熒光分子的較大吸收峰波長，且測定光波量接近于較大發(fā)射光波峰時,，得到的熒光強(qiáng)度也較大,。TNFa免疫熒光免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫系統(tǒng)的功能和異常。

注意:從加熒光二抗起,后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行.DAPI復(fù)染核:爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min,。封片：爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min。玻片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片,。鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像,。（DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,，發(fā)藍(lán)光,；FITC激發(fā)波長465-495nm,，發(fā)射波長515-555nm，發(fā)綠光,；CY3激發(fā)波長510-560,，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光）,。兩種抗體同時孵育：由于FIT容易萃滅,，因此在孵育抗體時后孵育FITC二抗(孵育二抗一定要避光。

免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù),，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種,。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù),。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光技術(shù)是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種．它是在免疫學(xué),、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù),。Coons等于1941年初次采用熒光素進(jìn)行標(biāo)記抗體獲得成功。經(jīng)過幾十年的發(fā)展,，該技術(shù)已相當(dāng)成熟,。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法,。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),。在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用，所以人們習(xí)慣將熒光抗體技術(shù)稱為免疫熒光技術(shù)熒光抗原法是利用已知的熒光標(biāo)記物來追蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法,。

細(xì)胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,，他是一種抗原抗體反應(yīng)，好像對我們來說他顯得很遙遠(yuǎn)的樣子,，因為我們并不了解他能做什么,，通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì)、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù),。細(xì)胞免疫熒光,，這對很多人來說都是一次聽說這個東西，也不知道他對我們會有什么好處與壞處,，科學(xué)研究就是這樣子的,，普通老百姓是不會明白其中的道理的，但是這些研究也是確實的在我們的生活中取得了成果,，能夠讓大家過的更加舒適,。免疫熒光技術(shù)是一種利用熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體來定位抗原的技術(shù)。CD68免疫熒光IF

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞信號傳導(dǎo)和信號通路,。AR免疫檢測

免疫熒光-實驗步驟：細(xì)胞爬片免疫熒光：在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;（圓蓋片：13mm24孔；18mm12孔；20mm6孔）用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室溫通透20min(細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA（PBS配置）,室溫封閉30min5,吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量用PBS稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜,。加熒光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中室溫孵育50min,。AR免疫檢測