在***的研究中,，血管壁的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞成分的改變是疾病發(fā)展的關(guān)鍵因素。多重免疫組化可以同時標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物,，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）,，平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志物，如 α - 平滑肌肌動蛋白（α - SMA）,，以及炎癥細(xì)胞的標(biāo)志物,，如單核細(xì)胞趨化蛋白 - 1（MCP - 1）和白細(xì)胞介素 - 8（IL - 8）。通過觀察這些標(biāo)志物在***斑塊中的分布,，可以了解血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài),、平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移情況，以及炎癥細(xì)胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的,。例如,，MCP - 1 可以吸引單核細(xì)胞進(jìn)入血管壁，在斑塊內(nèi)分化為巨噬細(xì)胞,，IL - 8 則進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)展,。免疫熒光技術(shù)可以同時檢測多個目標(biāo)分子，通過不同顏色的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記,。NEUN免疫熒光檢查

免疫組化在骨髓疾病的研究和診斷中深入到細(xì)胞的**層面,。骨髓是人體重要的造血***，骨髓疾病如白血病,、骨髓增生異常綜合征等嚴(yán)重威脅著患者的健康,。在白血病的診斷中，免疫組化能夠檢測白血病細(xì)胞表面和內(nèi)部的標(biāo)志物,，從而確定白血病的類型,。例如，急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）和急性髓系白血?。ˋML）可以通過檢測不同的細(xì)胞標(biāo)志物如CD19、CD20（ALL相關(guān)）和CD13、CD33（AML相關(guān)）來區(qū)分,。這對于選擇合適的化療方案至關(guān)重要,，因為不同類型的白血病對化療藥物的反應(yīng)不同。在骨髓增生異常綜合征（MDS）的研究中,，免疫組化可以檢測骨髓細(xì)胞中的異常蛋白表達(dá),，了解造血干細(xì)胞的分化異常情況。此外,，免疫組化還能檢測骨髓微環(huán)境中的免疫細(xì)胞變化,，探究MDS的發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的治療方法提供理論依據(jù),。Fibronectin免疫熒光分析熒光抗體技術(shù)可用于檢測和定位各種抗原,，也可以用于檢測和定位抗體。

免疫熒光的原理：免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng),。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時，只要知道其中的一個因素,，就可以查出另一個因素,。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后,，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng),。直接法:將標(biāo)記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標(biāo)本上,，經(jīng)一定的溫度和時間的染色,，用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體，室溫下干燥后封片,、鏡檢,。

細(xì)胞爬片的免疫熒光步驟基本一致：1. 取出細(xì)胞爬片放到35mm或60mm用過的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍,。注意：有的時候作的細(xì)胞爬片可能比較小,，因此夾取的時候要小心，注意 反正面,，放在皿里洗比較方便,，避免了來回夾取，另外洗的時候加PBS不要太沖,，不要細(xì)胞沖下來,。洗的時候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉,，沒有等5分鐘或10分鐘,。2. 4%冷的多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3. 0.2%Triton X-100通透10分鐘,，PBS洗三遍,。4. 與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍,。5. 一抗4度濕盒內(nèi)過夜,，也可37度2小時，感覺前者效果好,，PBS洗三遍,。6. 二抗室溫2小時(避光)，或者37度1半小時,，PBS洗三遍,。7. 較好用DAPI染核，然后直接照熒光片,。8. 蒸餾水洗掉PBS,，甘油封片，指甲油封片子的四周,，因為甘油不象樹脂那樣會干，所以不用指甲油封的話會弄的一塌糊涂,。免疫熒光技術(shù)是一種以熒光素標(biāo)記抗體來定位抗原物質(zhì)的高度發(fā)達(dá)的標(biāo)記免疫技術(shù),。

在自身免疫性皮膚病如紅斑狼瘡的研究中，皮膚組織中存在多種免疫復(fù)合物沉積和自身抗體結(jié)合的現(xiàn)象,。利用多重免疫熒光,，我們可以用不同顏色標(biāo)記不同類型的免疫復(fù)合物、自身抗體以及皮膚細(xì)胞的標(biāo)志物,。例如,，用綠色熒光標(biāo)記抗核抗體（ANA），紅色熒光標(biāo)記皮膚基底細(xì)胞的標(biāo)志物,，藍(lán)色熒光標(biāo)記補(bǔ)體成分,。這樣就能清晰地看到ANA在皮膚基底細(xì)胞上的結(jié)合位置、免疫復(fù)合物與補(bǔ)體的沉積關(guān)系,，有助于深入理解紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制,，提高診斷的準(zhǔn)確性。在皮膚**的研究方面,，多色免疫熒光可用于標(biāo)記皮膚腫瘤細(xì)胞的不同分化標(biāo)志物,、**微環(huán)境中的免疫細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞。比如,，用綠色熒光標(biāo)記皮膚鱗狀細(xì)胞*中的角蛋白標(biāo)志物,，紅色熒光標(biāo)記**浸潤淋巴細(xì)胞，藍(lán)色熒光標(biāo)記**血管內(nèi)皮細(xì)胞。通過觀察這些標(biāo)記成分的分布和相互關(guān)系,，可以更好地了解皮膚**的生長,、侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制，為皮膚**的***提供新的思路,。免疫熒光技術(shù)可以用于研究神經(jīng)系統(tǒng)的功能和疾病,。CD11B免疫抗體

免疫熒光技術(shù)可以通過熒光信號顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì)。NEUN免疫熒光檢查

直接免疫熒光：單抗體（一抗）用于免疫染色和檢測目標(biāo)蛋白,。熒光素結(jié)合的一抗直接與目標(biāo)抗原結(jié)合,，并使用成像顯微鏡觀察。直接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn)：由于無需為兩種抗體選擇不同的物種反應(yīng)性,，從而降低了物種交叉反應(yīng)性問題,。與間接免疫熒光相比，時間縮短（操作步驟減少）,。直接免疫熒光的缺點(diǎn)：不允許通過二抗進(jìn)行信號放大,；檢測靈敏度降低；熒光素結(jié)合一抗的選擇有限,；與使用熒光二抗的檢測相比,，更昂貴。間接免疫熒光：使用兩種抗體（一抗和二抗）進(jìn)行免疫染色并檢測目標(biāo)蛋白,。首先,，用特異性一抗標(biāo)記目標(biāo)蛋白。然后,，熒光素結(jié)合的二抗（與一抗具有不同的物種反應(yīng)性）識別結(jié)合的抗原-抗體復(fù)合物并與一抗結(jié)合,。由于一個以上的二抗可以與一抗結(jié)合，熒光信號被放大,，提供了更高的檢測靈敏度,。NEUN免疫熒光檢查