目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦,。通常情況下,，只能到達(dá)并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層,，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV),，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進(jìn)行細(xì)胞間通訊來克服這一點(diǎn)。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm),，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后,，由于其表面存在細(xì)胞識別分子,，它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA,、小rna (miRNA)和信號因子的載體,，通過經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織,。它們可以由多種細(xì)胞分泌,，包括腫瘤細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞,、B細(xì)胞,、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元,。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中,。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn)。為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA,，含有核酸的脂質(zhì)體,、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。寧夏轉(zhuǎn)染試劑價格

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA,，含有核酸的脂質(zhì)體,、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定,，對于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少,。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落,，而新的成分,，如脂蛋白,，可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定,，還會改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***,。了解在體內(nèi)遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中,，在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中,，以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化,，可能有助于設(shè)計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng),。云南小動物轉(zhuǎn)染試劑基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。

在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30,、DC-30,、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS,、Effectene,、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高,。在這兩種細(xì)胞系中,，superect產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus,，而FuGene 6被認(rèn)為對細(xì)胞系相對安全,。在另一項比較人類和動物來源的不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中，豬氣管上皮細(xì)胞(PTE)被Effectene,、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細(xì)胞(HTE),。化學(xué)轉(zhuǎn)染后,，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力,。兩項被引用研究的綜合結(jié)果認(rèn)為動物細(xì)胞系可能比人類細(xì)胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細(xì)胞通常被認(rèn)為比貼壁細(xì)胞更難轉(zhuǎn)染,，因為轉(zhuǎn)染復(fù)合物對細(xì)胞的潛在附著減少懸浮細(xì)胞表面,。然而，一項比較Xfect,、Lipofectamine2000,、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明,，除了Xfect之外,，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的效率都高于貼壁細(xì)胞(Tammetal.，2016),。然而,，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚，未來可能會進(jìn)一步探索,。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例

影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理,。例如，電穿孔技術(shù)依賴于電場來增加宿主細(xì)胞膜的通透性,，以內(nèi)化外來核酸,。因此，電穿孔過程中的電壓和持續(xù)時間是決定電穿孔成功與否的重要因素,。施加高壓的長時間電穿孔可能會導(dǎo)致細(xì)胞損傷并降低轉(zhuǎn)染效率,。通過增加電脈沖的數(shù)量也可以提高電轉(zhuǎn)染效率，但這可能會降低細(xì)胞活力,。另一方面,，電轉(zhuǎn)染效率取決于所使用的細(xì)胞類型，每當(dāng)要電轉(zhuǎn)染一種新的細(xì)胞類型時,，應(yīng)優(yōu)化電穿孔條件,。一些細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞，即使在標(biāo)準(zhǔn)的電穿孔條件下也可能轉(zhuǎn)染不良,，而電轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞通?？梢援a(chǎn)生良好的轉(zhuǎn)染結(jié)果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉(zhuǎn)染效率的另一個關(guān)鍵參數(shù),。據(jù)報道,，電穿孔緩沖液中的ATP酶抑制劑如利多卡因可提高電穿孔后的細(xì)胞活力，而使用K+-based緩沖液的轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于Mg2+-based緩沖液,。假設(shè)Mg2+離子在***ATP酶以恢復(fù)電穿孔后的離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,，以比較大限度地減少細(xì)胞死亡，但可能會降低轉(zhuǎn)染效率,。因此,，應(yīng)優(yōu)化由多種成分組成的合適的電穿孔緩沖液配方，以確保轉(zhuǎn)染效率和電穿孔后細(xì)胞活力之間的平衡,。小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率,。

陽離子聚合物是一種非病毒載體，其結(jié)構(gòu)的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團(tuán),，這些基團(tuán)被質(zhì)子化成帶正電的聚合物,。陽離子聚合物可以通過靜電相互作用結(jié)合核酸，并將其凝聚成小的納米顆粒,。正電荷改善了與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜的相互作用,，并幫助多聚體在溶酶體降解發(fā)生之前逃離核內(nèi)體。隨后,，多聚體通過陽離子聚合物上帶正電基團(tuán)介導(dǎo)的質(zhì)子海綿效應(yīng)從核內(nèi)體中逸出,。此外,，核酸必須與陽離子聚合物分離，才能**終發(fā)揮其功能,。成功的核酸轉(zhuǎn)染需要轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性低。在確定陽離子聚合物是否是合適的核酸轉(zhuǎn)染試劑時,，必須考慮這兩個特點(diǎn),。一般認(rèn)為，陽離子聚合物的分子量越高,，其包封核酸和被細(xì)胞攝取的能力越強(qiáng),，細(xì)胞活力和核酸釋放越差。另一方面,，分子量越低的聚合物,，其濃縮核酸和被細(xì)胞攝取的能力就越低，但在細(xì)胞毒性和核酸釋放方面則表現(xiàn)得更好,。因此,，轉(zhuǎn)染時應(yīng)慎重考慮陽離子聚合物的分子量。一些化學(xué)修飾,，如聚乙二醇化和膽固醇修飾,，可以***改善聚合物的性能。此外,，可生物降解材料是降低細(xì)胞毒性的有效手段,。評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中,。西藏inhibtor轉(zhuǎn)染試劑

Severino et al.進(jìn)行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性,。寧夏轉(zhuǎn)染試劑價格

Severinoetal.進(jìn)行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現(xiàn)了人動力蛋白的表達(dá),，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細(xì)胞毒性,，并導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復(fù)合物和由魚精蛋白,、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細(xì)胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細(xì)胞),、HEK293(人胚胎腎細(xì)胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和A17(小鼠*細(xì)胞),。魚精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細(xì)胞系中更有效地實現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達(dá),，即使不同細(xì)胞系對轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物,。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體,，成功地將hESC(人類胚胎干細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率提高了四倍，同時保持較低的細(xì)胞毒性。這給我們帶來了希望,，納米顆粒能夠與具有所需官能團(tuán)的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺,。寧夏轉(zhuǎn)染試劑價格