PEI的分子量對細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響,。由于PEI在細(xì)胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高,，細(xì)胞毒性越強(qiáng),。此外,，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染,，但更難在細(xì)胞內(nèi)釋放核酸。另一方面,，PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低,，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此,，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的,。然而，一些改進(jìn)使PEI在應(yīng)用中更加先進(jìn),。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián),，可***降低細(xì)胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺,，伯胺的乙?；蛟诰酆衔锝Y(jié)構(gòu)中引入帶負(fù)電荷的丙酸或琥珀酸基團(tuán),，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功,。在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。天津轉(zhuǎn)染試劑公司

在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30,、DC-30,、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS,、Effectene,、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高,。在這兩種細(xì)胞系中,，superect產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus,，而FuGene 6被認(rèn)為對細(xì)胞系相對安全,。在另一項比較人類和動物來源的不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中,，豬氣管上皮細(xì)胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細(xì)胞(HTE),?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力,。兩項被引用研究的綜合結(jié)果認(rèn)為動物細(xì)胞系可能比人類細(xì)胞系更有效地轉(zhuǎn)染,。懸浮細(xì)胞通常被認(rèn)為比貼壁細(xì)胞更難轉(zhuǎn)染,，因為轉(zhuǎn)染復(fù)合物對細(xì)胞的潛在附著減少懸浮細(xì)胞表面,。然而,，一項比較Xfect,、Lipofectamine2000、Nanofectamin,、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明,，除了Xfect之外，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的效率都高于貼壁細(xì)胞(Tammetal.,，2016),。然而，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚,，未來可能會進(jìn)一步探索,。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例天津轉(zhuǎn)染試劑公司評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中,。

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,，但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對細(xì)胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要,。納米顆粒參與內(nèi)皮運輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計**精確的方法,，將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同,，這使它們能夠通過內(nèi)吞作用將DNA運輸過細(xì)胞膜,。DNA被包裹起來，很容易從核內(nèi)體中釋放出來,，也被核酸酶保護(hù)著不被消化,。由于有許多不同種類的納米顆粒，找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞的納米顆粒是至關(guān)重要的,。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能,、復(fù)雜的運輸單元，可以提高穿越細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)運輸?shù)男?。將蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上,，根據(jù)細(xì)胞類型的不同,，轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。

RNA和信使RNA與DNA轉(zhuǎn)染類似,，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞,。與涉及DNA的轉(zhuǎn)染相比，RNA轉(zhuǎn)染可能產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率,，因為后者不需要穿越核膜,。在不需要基因組整合、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的情況下,，RNA轉(zhuǎn)染也可能加速所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)生,。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達(dá)特定的,，所需的蛋白質(zhì),。然而，RNA轉(zhuǎn)染后,，蛋白質(zhì)表達(dá)是短暫的,，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對較差,，因此在細(xì)胞內(nèi)運輸時更容易降解,。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控和RNA修飾的能力,。小RNA包括microRNAs(miRNAs),、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等,。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA,。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標(biāo)mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,。與miRNAs和piRNAs類似,，siRNA也在調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)中發(fā)揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp,，可表達(dá)為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA,。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結(jié)合mRNA上的互補(bǔ)序列來降解它,。納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,。

共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細(xì)胞的過程。組合的一些例子包括多個質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ,，以及多個miRNAs進(jìn)入同一個細(xì)胞,。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞。其應(yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體,。一個例子是在HEK293細(xì)胞系中,，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒,。此外,，多個質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系,。隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率,。山西inhibtor轉(zhuǎn)染試劑

PEI的分子量對細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響,。天津轉(zhuǎn)染試劑公司

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細(xì)胞中,。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子,、復(fù)制起點,、多個克隆位點,、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源,，而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點,，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá),。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染,。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率,，線性DNA更容易被外切酶降解,。然而，線性化的DNA更具重組性,，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染,。天津轉(zhuǎn)染試劑公司