為什么要使用熒光染料,？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色,、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì),，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),。他們提供：高靈敏度：對(duì)于大多數(shù)分析物,，熒光測(cè)量的靈敏度比吸光度測(cè)量高1000倍，即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬(wàn)億分之一）的檢測(cè)限,。寬線性動(dòng)態(tài)范圍,。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多,，分光光度測(cè)量通常會(huì)遇到干擾問(wèn)題,。在進(jìn)行熒光測(cè)量時(shí)不會(huì)遇到這個(gè)問(wèn)題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力,。高通量：熒光測(cè)量具有簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的協(xié)議,，并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效,、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑,。貴州蘇州熒光染料

Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖?。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右，它的熒光肉眼觀察很明亮,，并且對(duì)pH不敏感,，在共聚焦顯微鏡中可以用532nm（肩峰）或者556nm（頂峰）的激光束激發(fā)，在普通熒光顯微鏡中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察,，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用,。Cy3也是Dil等細(xì)胞電位追蹤劑的母核，所以它是在生物技術(shù)中非常有用的熒光染料,。在熒光成像時(shí),，Cy3的背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來(lái)標(biāo)記蛋白,，抗體,，多肽等，它常見(jiàn)的使用是標(biāo)記核酸分子（DNA和RNA）,?；跓晒鈭D譜的相似性，Cy3可以被TAMRA,，TRITC, BODIPY TMR等染料替代,，在需要更明亮，更穩(wěn)定的替代物時(shí),，可以考慮使用AF547或者AF555等,。云南廣州熒光染料吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡(jiǎn)稱(chēng)ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料,。

納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒,。由于它們的小尺寸，納米粒子通常用于不同類(lèi)型的細(xì)胞和組織的熒光成像,。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn),、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn),、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等,。在成像中，與其他分子熒光團(tuán)和探針相比,，納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢(shì),，使其成為理想的選擇。除了提高亮度外,，納米粒子是惰性的并且往往分布均勻,，這有助于在成像過(guò)程中獲得更好的結(jié)果。此外,，與各種分子熒光團(tuán)相比,，納米顆粒和納米材料沒(méi)有細(xì)胞毒性,，并且不受非特異性結(jié)合問(wèn)題的影響。由于這些特性,，大多數(shù)熒光納米顆粒（染色納米顆粒）可以內(nèi)化到細(xì)胞/組織中,，并容易靶向給定部位。

CY5.5-NHS熒光染料是一種廣泛應(yīng)用于生物標(biāo)記和成像的熒光染料,，CY5.5-NHS熒光染料具有優(yōu)異的熒光性能,。其激發(fā)波長(zhǎng)約為675nm，發(fā)射波長(zhǎng)約為695nm,，位于紅色光譜區(qū)域,，這使得它在生物樣本中具有較強(qiáng)的穿透力，能夠深入組織內(nèi)部進(jìn)行標(biāo)記和成像,。此外,，CY5.5-NHS熒光染料具有較高的熒光量子產(chǎn)率和光穩(wěn)定性，可以在較長(zhǎng)時(shí)間的激發(fā)下保持穩(wěn)定的熒光信號(hào),，從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。CY5.5-NHS熒光染料作為一種***的熒光染料，在生物科學(xué)研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景,。其優(yōu)異的熒光性能,、良好的生物相容性、***的適用范圍以及易于合成和修飾的優(yōu)點(diǎn),，使得它成為生物醫(yī)學(xué)研究中不可或缺的重要工具,。Hoechst 33342是一種可透過(guò)細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光,。

一種發(fā)光雜環(huán)化合物,，存在于生物發(fā)光的生物體中，如螢火蟲(chóng),。在含有三磷酸腺苷的情況下,，通過(guò)熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光?？捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物,，其量子效率為0.88,，是Luminol的20倍。反應(yīng)原理：首先,，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù),。它還用于報(bào)告基因檢測(cè),?？膳c小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用，用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè),。D-熒光素游離酸（D-Luciferin,freeacid）,、D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-熒光素鈉鹽（D-Luciferin,sodiumsalt），鉀鹽,、鈉鹽的形式是**通用的,，因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒ｂ淃}也是***動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式,。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm,。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右。廣東高分子熒光染料

熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素,、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等,。貴州蘇州熒光染料

使用螢火蟲(chóng)熒光素酶（Fluc）作為報(bào)告基因和 D-熒光素作為底物的生物發(fā)光成像（BLI）是目前應(yīng)用*****的技術(shù)。將總信號(hào)強(qiáng)度相對(duì)于 D-熒光素注射后的時(shí)間進(jìn)行繪制,，以生成時(shí)間-強(qiáng)度曲線,。除了峰值信號(hào)外，還確定注射 D-熒光素后固定時(shí)間點(diǎn)（5,、10,、15 和 20 分鐘）的信號(hào)作為峰值信號(hào)的替代。給定時(shí)間-強(qiáng)度曲線中的信號(hào)針對(duì)曲線中的峰值信號(hào)進(jìn)行歸一化,，以表示 D-熒光素注射后時(shí)間變化的模式[3],。每克體重注射 10 μL D-熒光素（腹膜內(nèi)或靜脈注射）儲(chǔ)備液：對(duì)于 20 g 小鼠，標(biāo)準(zhǔn) 150 mg/kg 注射通常約為 200 μL,。在室溫下解凍 D-熒光素（鉀鹽或鈉鹽）并溶解在 dPBS（不含鈣或鎂）中,，**終濃度為 15 mg/mL。通過(guò)吸取 5-10 mL 無(wú)菌水來(lái)預(yù)濕 0.22 μm 過(guò)濾器,。貴州蘇州熒光染料