CY5.5-NHS熒光染料是一種廣泛應(yīng)用于生物標記和成像的熒光染料,，CY5.5-NHS熒光染料具有優(yōu)異的熒光性能,。其激發(fā)波長約為675nm，發(fā)射波長約為695nm,，位于紅色光譜區(qū)域,，這使得它在生物樣本中具有較強的穿透力，能夠深入組織內(nèi)部進行標記和成像。此外,，CY5.5-NHS熒光染料具有較高的熒光量子產(chǎn)率和光穩(wěn)定性,，可以在較長時間的激發(fā)下保持穩(wěn)定的熒光信號，從而確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性,。CY5.5-NHS熒光染料作為一種***的熒光染料,，在生物科學研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。其優(yōu)異的熒光性能,、良好的生物相容性,、***的適用范圍以及易于合成和修飾的優(yōu)點，使得它成為生物醫(yī)學研究中不可或缺的重要工具,。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料,。納米熒光染料DIO

三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上,。2,、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液,，但要使表面保持濕潤,。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞,。4、37℃孵育細胞2~20min,，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同,。可以20min作為起始孵育時間,，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記效果,。5、吸干染料工作液,，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5~10min,，然后吸干培養(yǎng)基,。但要使表面保持濕潤。四：結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進行檢測,，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析,。合肥熒光染料水溶D-熒光素鉀鹽小動物成像。

CY7是一種CY染料,。CY為花菁(Cyanine)的縮寫,，是由奇數(shù)個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物,。菁類化合物具有波長長、吸收和發(fā)射可調(diào),、消光系數(shù)高的特點CY系染料常被用于蛋白,、抗體以及小分子化合物的標記，對于蛋白抗體的標記,，可以通過簡單的混合反應(yīng)來完成結(jié)合,，下面我們介紹了蛋白抗體標記的標記方法，具有一定的參考意義,。一,、比較好蛋白制備1)為獲得標記效果，請制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL,。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5,。如果pH值低于8.0,，應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL,，標記效率會**降低。為獲得比較好標記效率,，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL,。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子,，否則會影響標記效率,。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲備液,。通過移液器或渦旋混合均勻計算,。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個可進行后續(xù)標記實驗。

InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料,，可使用532nm激光線激發(fā),，并使用TRITC（四甲基羅丹明）濾光片組進行可視化。除了免疫細胞化學應(yīng)用,，Cy3染料通常用于標記核酸,。發(fā)光說明：Cy3熒光團也是親脂性神經(jīng)元和長期DiI細胞追蹤試劑的基礎(chǔ)，該試劑添加烷基尾(≥12個碳）添加到**熒光團上,。Cy3染料是用于成像,、流式細胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ),。根據(jù)化學結(jié)構(gòu),，Cy3可分為普通Cy3（常簡稱Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）。Cy3水溶性較低,，在水相標記反應(yīng)時常常需要使用有機共溶劑,，常用有機溶劑包括DMF,，DMSO和乙腈等?；腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物,，附帶2個或3個磺酸根離子。由于磺化效應(yīng),，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,，熒光穩(wěn)定性也提高，可賴受更長時間的曝光,?；腔疌y3水溶性極高，所以在標記反應(yīng)中不需要使用有機共溶劑,，特別適合標記蛋白等對有機溶劑敏感的生物分子,。另外磺化Cy3水溶性極好，并且染料分子本身帶電荷,，標記到蛋白表面后不會引發(fā)疏水性蛋白聚集,，提高熒光標記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當然,，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇,，DMSO，DMF等有機溶劑,，標記反應(yīng)也可以在純有機溶劑中進行,。DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在小動物成像中用來示蹤,。

如何選擇的染料,？

考慮到熒光染料種類繁多，您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料,？以下是您需要考慮的一些因素,。※與實驗設(shè)計的兼容性：雖然它們可能與其他熒光團共享一些光譜相似性,，但每種染料都是***的,，并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長,、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性,。為確保成功，請選擇與您的實驗設(shè)計相輔相成的一種,。與設(shè)備的兼容性：選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料,。在選擇合適的熒光儀器時，請考慮儀器的靈敏度,、動態(tài)范圍,、穩(wěn)定性和通量,、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果,，請確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測方法相匹配,。與樣品中其他熒光材料的相容性：在雙重或三重標記實驗中，您選擇的染料的發(fā)射和激發(fā)曲線不應(yīng)與其他熒光團重疊,。由于許多天然存在的細胞成分會以與您選擇的染料或探針相同的波長發(fā)出熒光,，因此您還需要確保可以從背景自發(fā)熒光中清楚地識別所選染料產(chǎn)生的信號,。 南京星葉生物熒光染料標記蛋白,。合肥熒光染料水溶

Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）熒光染料。納米熒光染料DIO

過標記——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團大于10mol,。雖然過標記的蛋白也可以使用,，但可能會引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性,，這些都會造成非特異性結(jié)合,。過標記還會引起熒光淬滅?？梢栽黾拥鞍谆驕p少反應(yīng)時間,。3．未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物，但仍可能會有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中,，會使標記計算的值偏高?？捎梅蛛x柱再次分離或透析去除,。4．蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次,。納米熒光染料DIO