Hoechst33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,，對(duì)細(xì)胞的毒性較低,。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml,。儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存,，有效期一年。注意事項(xiàng)：Hoechst33258對(duì)人體有害,，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù),。熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè),。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。抗熒光淬滅封片液(P0126)可以向碧云天訂購(gòu),。為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作注意事項(xiàng)：Hoechst33342對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù),。熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題,，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效,、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑,。新疆濟(jì)南熒光染料

選擇熒光染料時(shí)要考慮那些因素：激發(fā)波長(zhǎng)處的消光系數(shù)應(yīng)盡可能高：消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應(yīng)該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率,。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度,。熒光染料應(yīng)該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多,。光致變色行為：對(duì)于STORM實(shí)驗(yàn),，您需要一個(gè)閃爍的熒光團(tuán),。但是，對(duì)于分子跟蹤實(shí)驗(yàn),，您***不想要閃爍的熒光團(tuán),。活/死細(xì)胞滲透性,。您想要的反應(yīng)側(cè)基（例如HaloTag,、抗體等）。當(dāng)您使用多個(gè)熒光探針時(shí),，尤其是當(dāng)您量化共定位時(shí),，請(qǐng)謹(jǐn)慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨(dú)測(cè)試所有熒光探針以評(píng)估滲透,。中國(guó)香港供應(yīng)熒光染料DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織,，在小動(dòng)物成像中用來(lái)示蹤。

InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料,，可使用532nm激光線激發(fā),，并使用TRITC（四甲基羅丹明）濾光片組進(jìn)行可視化。除了免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用,，Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸,。發(fā)光說(shuō)明：Cy3熒光團(tuán)也是親脂性神經(jīng)元和長(zhǎng)期DiI細(xì)胞追蹤試劑的基礎(chǔ)，該試劑添加烷基尾(≥12個(gè)碳）添加到**熒光團(tuán)上,。Cy3染料是用于成像,、流式細(xì)胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ),。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，Cy3可分為普通Cy3（常簡(jiǎn)稱Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）,。Cy3水溶性較低,，在水相標(biāo)記反應(yīng)時(shí)常常需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF,，DMSO和乙腈等,。磺化Cy3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物,，附帶2個(gè)或3個(gè)磺酸根離子,。由于磺化效應(yīng)，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,，熒光穩(wěn)定性也提高,，可賴受更長(zhǎng)時(shí)間的曝光?；腔疌y3水溶性極高,，所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑,，特別適合標(biāo)記蛋白等對(duì)有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好,，并且染料分子本身帶電荷,，標(biāo)記到蛋白表面后不會(huì)引發(fā)疏水性蛋白聚集，提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性,。當(dāng)然,，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇，DMSO,，DMF等有機(jī)溶劑,，標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行。

三,、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗(yàn)：D-熒光素鉀鹽,，無(wú)菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配制）1,、貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時(shí)或過(guò)夜,，使細(xì)胞貼壁。懸浮細(xì)胞：可以將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板后直接進(jìn)行后續(xù)操作,，無(wú)需孵育,。如果倍增時(shí)間相對(duì)較短，則應(yīng)考慮倍增時(shí)間進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。2,、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無(wú)菌水中，制備成100X熒光素儲(chǔ)備液（15mg/ml）,，輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素鉀鹽完全溶解,。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。3,、用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲(chǔ)備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml）,，即配即用,。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,。5,、在成像前，將適量熒光素工作液加入細(xì)胞中,，然后進(jìn)行圖像分析,。注意：成像前在37℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號(hào)。孵育時(shí)間取決于特定的細(xì)胞類(lèi)型。一般來(lái)說(shuō)孵育10分鐘就足夠了,，根據(jù)需要進(jìn)行測(cè)試和調(diào)整,。6、每隔10分鐘,，**多40分鐘,，使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光，確定動(dòng)力學(xué)曲線并找出細(xì)胞的峰值成像時(shí)間點(diǎn)吲哚菁綠（Indocyanine Green,，簡(jiǎn)稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料,。

第二種***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化學(xué)公司HoechstAG生產(chǎn),。Hoechst33258,、Hoechst33342和Hoechst34580都是鄰苯二甲酰亞胺，具有向A-T富集區(qū)插入的趨勢(shì),，因此后者不常使用,。與DAPI相似，此類(lèi)染料受到紫外線激發(fā)并在455nm下發(fā)射比較大值,，在無(wú)結(jié)合狀態(tài)下變?yōu)?10–540nm,。Hoechst染料還具有細(xì)胞滲透作用，因此可用于固定細(xì)胞和活細(xì)胞,。與DAPI不同是,，Hoechst染料毒性更低。DNA染色劑碘化丙啶無(wú)法透過(guò)細(xì)胞膜,。在細(xì)胞培養(yǎng)中,，因?yàn)樵撊旧珓o(wú)法進(jìn)入完好的細(xì)胞內(nèi)，所以常常被用來(lái)區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,。碘化丙啶也是一種結(jié)合劑,，但對(duì)不同的堿基沒(méi)有特異性。在核酸結(jié)合態(tài)下,，其比較大激發(fā)波長(zhǎng)為538nm,，比較高發(fā)射波長(zhǎng)為617nm。未結(jié)合狀態(tài)下碘化丙啶的比較大激發(fā)和發(fā)射被移到較短的波長(zhǎng)和較弱的強(qiáng)度,。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結(jié)合。要區(qū)分DNA和RNA,，必須使用足夠的聚合酶,。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色,。云南大連熒光染料

FITC熒光染料標(biāo)記方法,。新疆濟(jì)南熒光染料

細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長(zhǎng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察,。由于細(xì)胞小而復(fù)雜,，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄危y以觀察其形態(tài),、結(jié)構(gòu),，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前,，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù),，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法,。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段,，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō),，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易,。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻,、染色時(shí)切片脫落等都是很常見(jiàn)的問(wèn)題,。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR,、DiO和DiI染料是最常見(jiàn)的細(xì)胞膜染料（見(jiàn)表2）,，它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究,。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后,，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色,。其中DiD染料的染色效率高,，染色均一，熒光不易猝滅,，無(wú)明顯細(xì)胞毒性,，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究,，如Treg細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞,、造血干祖細(xì)胞等,。 新疆濟(jì)南熒光染料