在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液,。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢,，在開放式的培養(yǎng)條件中,，若加入HEPES,，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右,。HEPES分子量為238.31,，化學(xué)名：4-羥乙基哌嗪乙磺酸，分子式:C8H18N2O4S,。HEPES常用于生物緩沖劑,，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒,、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里,。對細(xì)胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑,，能較長時間控制恒定的pH范圍,。使用終濃度為10-50mmol/L。關(guān)于HEPES緩沖溶液的配制，不同的文獻(xiàn)資料有不同的說法,。根據(jù)用途,，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽,。GMP條件下生產(chǎn)AVT穩(wěn)定供貨注射級HEPES,。山東輔料HEPES現(xiàn)貨供應(yīng)

外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的方法有很多種，如磷酸鈣轉(zhuǎn)染法,、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法,、脂質(zhì)體法,、電穿孔法,、顯微注射法等。2×HEPES緩沖鹽溶液主要用于磷酸鈣轉(zhuǎn)染,，其主要成分為HEPES,，HEPES是一種非離子兩性緩沖劑，能有效控制pH在范圍,，尤其在pH具有較好的緩沖能力,，終濃度一般為mmol/L，培養(yǎng)液內(nèi)含mmol/LHEPES 即可達(dá)到較好的緩沖能力,。Leagene HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS)是一種常用的細(xì)胞轉(zhuǎn)染溶液,，主要由HEPES、氯化鈉,、磷酸鹽等組成,，其**適pH值為，經(jīng)過濾除菌處理,。影響磷酸鈣轉(zhuǎn)染效率的因素主要有沉淀中DNA含量,、DNA 在細(xì)胞上停留的時間、休克時間,。Leagene 2xHeBS要求DNA濃度在為宜,，Hela、BALB等細(xì)胞沉淀放置,，CHO,、DUKX、BⅡ等細(xì)胞可以通過甘油,、DMSO進(jìn)行熱休克處理以提高轉(zhuǎn)染效率,。山東輔料HEPES現(xiàn)貨供應(yīng)GMP條件下生產(chǎn)注射級HEPES。

儲存方法：HEPES緩沖液在2-8℃下可保存1年,。注意事項：HEPES緩沖液運輸時需要加冰袋,。但儲存時避免冷凍，否則會有鹽類物質(zhì)析出。N-三(羥甲基)甲基甘氨酸Tricine,，CAS是5704-04-1,，是一種兩性離子緩沖液，名字由Tris和glycine衍生而來,，結(jié)構(gòu)類似于Tris,，但是高濃度具有比Tris更弱的抑制性，也是“Good”緩沖液之一,，**初開發(fā)用于提供葉綠體反應(yīng)的緩沖體系,。Tricine的有效pH緩沖范圍為7.4-8.8，pKa=8.1（25℃）,，常用做電泳緩沖液,，以及用來重懸細(xì)胞沉淀。Tricine具有低負(fù)電荷和高離子強(qiáng)度的特性,，非常適用于電泳分離1~100kDa的低分子量蛋白,。基于螢火蟲熒光素酶的ATP分析實驗中,，比較10種常見的緩沖液,，Tricine（25mM）表現(xiàn)出比較好的檢測效果。另外,，在自由基誘導(dǎo)的膜損傷實驗中,，Tricine還是一種有效的羥自由基清除劑。作者：泰安格林化工鏈接：

（5）緩沖溶液在穩(wěn)定性方面各顯利弊：①Tris-HCl緩沖溶液pH值受外界影響較大,，一般現(xiàn)用現(xiàn)配,。同時需要注意Tris是一級脂肪胺，分子結(jié)構(gòu)中的氨基易與醛類化合物發(fā)生縮合反應(yīng),，是一些生化實驗的抑制劑,。②硼酸鹽緩沖液有一定毒性，不宜用做注射液或者口服液的緩沖液,。③雖然磷酸鹽緩沖溶液穩(wěn)定性很好,，但磷酸根具有一定的絡(luò)合能力會抑制一些與金屬離子有關(guān)的生化反應(yīng)。④HEPES緩沖溶液是較理想的生物緩沖劑,，但其有多種生物學(xué)效應(yīng),，如：縮短血液凝固時間、減緩平滑肌收縮頻率以及阻斷細(xì)胞膜上的陰離子通道等,，在一定程度上會影響患者身體狀態(tài),，使用時應(yīng)需注意。國內(nèi)艾偉拓注射用HEPES已登記,。

2021年全球HEPES緩沖液市場銷售額達(dá)到了億美元,，預(yù)計2028年將達(dá)到億美元,，年復(fù)合增長率（CAGR）為%（2022-2028）。地區(qū)層面來看,，中國市場在過去幾年變化較快,，2021年市場規(guī)模為百萬美元，約占全球的%,，預(yù)計2028年將達(dá)到百萬美元,，屆時全球占比將達(dá)到%。消費層面來說,，目前地區(qū)是全球比較大的消費市場,，2021年占有%的市場份額，之后是和,，分別占有%和%,。預(yù)計未來幾年，地區(qū)增長**快,，2022-2028期間CAGR大約為%,。生產(chǎn)端來看,，和是比較大的兩個生產(chǎn)地區(qū),，2021年分別占有%和%的市場份額，預(yù)計未來幾年,，地區(qū)將保持**快增速,，預(yù)計2028年份額將達(dá)到%。注射級,，低內(nèi)***,、國產(chǎn)化穩(wěn)定供應(yīng)、高性價比注射級HEPES找AVT,！山東高純HEPES使用注意事項

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(1)hepes緩沖液可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,再過濾除菌.每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH調(diào)pH至7.2,濾過除菌后使用.此時HEPES的使用濃度為10mmol/L.(2)亦可配成100x貯存液（lmol/L），使用前取99ml培養(yǎng)液加入lml貯存液,，**終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L,。lmol/L（100x）hepes緩沖液配制方法:取23.8gHEPES溶于90ml雙蒸水中,用lNNaOH調(diào)pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過濾除菌,分裝小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存.作者：知乎用戶0mmkBe山東輔料HEPES現(xiàn)貨供應(yīng)

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