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來源： 發(fā)布時間：2024-06-04

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù),。以下是ChIP實驗的實驗方法概述：
1. 交聯(lián)：將細胞與交聯(lián)劑（如1%甲醛）孵育，通常在室溫下進行10-15分鐘,。
2. 終止交聯(lián)：添加甘氨酸以終止交聯(lián)反應(yīng),，孵育5分鐘,。
3. 收集細胞：通過離心收集細胞，并用PBS洗滌以去除交聯(lián)劑,。
4. 細胞裂解：使用裂解緩沖液裂解細胞,，釋放染色質(zhì)。
5. 染色質(zhì)剪切：使用超聲波或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當大小的片段,。
6. 免疫沉淀：將剪切后的染色質(zhì)與特異性抗體孵育,，然后添加蛋白A/G磁珠。
7. 洗滌：用低鹽,、高鹽和LiCl洗滌液洗滌磁珠,，去除非特異性結(jié)合物。
8. 洗脫：用洗脫緩沖液洗脫DNA,。
9. 逆轉(zhuǎn)交聯(lián)：用蛋白酶K處理,，然后在65°C下加熱過夜以逆轉(zhuǎn)交聯(lián),。
10. DNA純化：使用商業(yè)試劑盒或標準酚/氯仿方法純化DNA。
11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA,，或進行測序以確定蛋白質(zhì)結(jié)合位點,。
免疫沉淀選瓊脂糖珠還是磁珠？上海蛋白免疫沉淀磁珠哪個公司好用

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RIP（RNA Immunoprecipitation,，RNA免疫沉淀）的實驗設(shè)計需要考慮多個方面,，以確保實驗的準確性和可重復(fù)性。
1. 目標蛋白的選擇：確定你想要研究的目標RNA結(jié)合蛋白（RBP）,。
2. 陽性和陰性對照：設(shè)計實驗時,，需要包括陽性對照和陰性對照。
3. 細胞培養(yǎng)與裂解：選擇合適的細胞類型進行培養(yǎng),。
4. 抗體孵育：將特異性抗體與細胞裂解液孵育,，以形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。
5. 免疫沉淀：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子進行免疫沉淀,，捕獲抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物,。
6. 洗滌和分離：洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和RNA。從珠子上分離RNA,，可能需要使用低pH緩沖液或蛋白酶K處理,。
7. RNA分析：使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下來的RNA,。
8. 數(shù)據(jù)分析：對實驗結(jié)果進行定量分析,，比較不同樣品之間的RNA水平。

9. 實驗重復(fù)：為了確保結(jié)果的可靠性,，實驗應(yīng)該進行至少三次重復(fù),。 北京RIP免疫沉淀實驗原理免疫沉淀技術(shù)RIP的實驗設(shè)計。

10. 技術(shù)驗證：使用其他技術(shù)（如RNA-pull down或FISH）驗證RIP實驗結(jié)果,。
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免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況,。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效,、快速結(jié)合抗體,，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面,。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力,，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合,。
簡而言之,，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強，而磁珠在得率,，可重復(fù)性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢,。

免疫共沉淀分析（Co-IP）實驗原理與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標抗原特異性的固相化抗體,；但IP的目標是純化單一抗原,，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實驗中,，已知抗原稱為誘餌蛋白,，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白,、信號分子,、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等,，蛋白間相互作用強度范圍可能介于高度瞬時和十分穩(wěn)定之間,。基本的Co-IP實驗方案與IP相同,，實際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP,。但是,，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化,，優(yōu)化時，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強度以及抗體-誘餌蛋白的親和力,。
免疫沉淀技術(shù)的優(yōu)缺點,？

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Co-IP的優(yōu)勢：
1. 生理相關(guān)性：Co-IP可以在接近生理條件的條件下捕獲蛋白質(zhì)相互作用。
2. 特異性：使用特異性抗體可以提高實驗的特異性,。
3. 廣泛應(yīng)用：Co-IP技術(shù)適用于多種樣本類型,，包括細胞培養(yǎng)、組織樣本等,。
Co-IP的局限性：
1. 抗體依賴性：需要高質(zhì)量的特異性抗體,，否則可能得到假陽性或假陰性結(jié)果。
2. 非特異性結(jié)合：可能存在非特異性結(jié)合問題,，需要仔細的實驗設(shè)計和對照來控制,。
3. 技術(shù)挑戰(zhàn)：對于低豐度或弱相互作用的蛋白質(zhì)，Co-IP可能面臨技術(shù)挑戰(zhàn)。
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免疫沉淀樣本的制備,。上海蛋白免疫沉淀磁珠哪個公司好用

“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的結(jié)合蛋白，進行小規(guī)模的蛋白質(zhì)親和純化的實驗,。更確切地說,，IP是采用固定在微珠支持物(一般是瓊脂糖樹脂)上的特定抗體，從復(fù)雜的混合物中,，純化單一抗原的實驗,。固定化蛋白質(zhì)復(fù)合物的組裝既可以分步進行，也可以一步完成,。

常見的加樣順序：抗體和樣本(如細胞裂解物)一起孵育,，然后加入親和微珠，用于捕獲抗體-抗原復(fù)合物,。也可以將抗體和微珠(通過抗體結(jié)合蛋白,，如蛋白A、G或A/G等,，直接或間接結(jié)合抗體)先進行孵育,，然后再加入含有抗原的樣本。當抗原,、抗體和固相支持物產(chǎn)生結(jié)合以后,，充分洗滌微珠，再采用適當?shù)南疵摼彌_液從支持物上洗脫抗原,。
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上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科學(xué)上游工具類企業(yè),。聚焦于細胞生物學(xué)相關(guān)的化學(xué)技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn)，產(chǎn)品覆蓋細胞培養(yǎng)產(chǎn)品如胎牛血清,，支原體檢測,，支原體去除試劑等，細胞轉(zhuǎn)染產(chǎn)品如轉(zhuǎn)染試劑,，及細胞檢測產(chǎn)品如增殖凋亡檢測,，報告基因等多個科研場景，給終端客戶提供良好的產(chǎn)品以及服務(wù),。

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