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支原體去除

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-07

細(xì)胞培養(yǎng)中，需要去除支原體的污染：支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問題之一,，細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中,，支原體的污染率約為15%-35%。并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖 
02/ 改變蛋白質(zhì),、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達(dá),、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài) 
04/ 損害膜和細(xì)胞器 
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 
06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失,，耽誤研究時(shí)間
07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性 降低
08/ 生物安全問題
支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)？支原體去除

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細(xì)胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測(cè)的原因主要有以下幾點(diǎn)：
1. 支原體污染率高：常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計(jì)在15-35%之間,。
2. 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果：支原體污染會(huì)嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度,，影響培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和生理特征。
3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)：支原體是極小的細(xì)菌,，其細(xì)胞膜周圍沒有細(xì)胞壁,，無法用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到。
4. 難以消滅：支原體能夠迅速滲透整個(gè)實(shí)驗(yàn)室，一旦污染很難徹底消滅,。
5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,，監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦檢測(cè)所有細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體。
6. 保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性：定期進(jìn)行支原體檢測(cè)和去除,，確保無支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi),，才能獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
上海細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑現(xiàn)貨支原體污染如何預(yù)防,？

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細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測(cè)方法有多種,，以下是一些常用的檢測(cè)手段：

1. 顯微鏡檢測(cè)：通過相差顯微鏡觀察細(xì)胞，支原體在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間會(huì)呈現(xiàn)為暗色微小顆粒,。
2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結(jié)合,，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察,。染色后的支原體會(huì)在細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞膜表面顯示為亮綠色小點(diǎn),。
3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡(jiǎn)便快速的方法,。
4. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：使用特定的引物對(duì)支原體DNA進(jìn)行擴(kuò)增,，是一種高靈敏度的檢測(cè)方法。
5. 等溫?cái)U(kuò)增法：基于LAMP技術(shù),，室溫反應(yīng)后觀察顏色變化確認(rèn)是否有支原體污染,。

支原體污染的來源主要包括以下幾個(gè)方面：
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中可能存在支原體污染源，如空氣中的塵埃,、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等,。
2. 實(shí)驗(yàn)操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體,，造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染,。
3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染,，也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染,。
4. 細(xì)胞交叉污染，即使用已受污染的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),，可能會(huì)污染其他細(xì)胞,。
5. 實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染，如未徹底消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)器材,。
6. 人體是某些支原體的正常菌群,，因此操作人員的疏失也可能成為污染源。
7. 細(xì)胞庫管理不善,，造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染,。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌,、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見,，必須通過特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)
一步法快速支原體檢測(cè)的原理,？

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支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下,，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間,。
黑膠蟲污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清,，邊界不清晰,，有粗糙感。

污染的影響：
支原體污染：可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢,，甚至從培養(yǎng)器皿脫落,，影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá),。
黑膠蟲污染：與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),，開始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒有什么影響,，但當(dāng)數(shù)量多時(shí),，細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到影響直至死亡。

污染的來源：
支原體污染：可能來源于工作環(huán)境的污染,、操作者本身,、培養(yǎng)基的污染、交叉污染,、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染以及用來制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染,。
黑膠蟲污染：可能來源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染，也可能通過培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染,。
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支原體污染和黑膠蟲污染有什么區(qū)別？支原體去除

對(duì)于同一個(gè)樣品,，如果PCR檢測(cè)結(jié)果為陽性而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒結(jié)果為陰性,，可能的原因包括：

1. 靈敏度差異：PCR方法通常具有較高的靈敏度，可以檢測(cè)到單個(gè)拷貝的支原體DNA,。相比之下,，一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數(shù)才能檢測(cè)出陽性結(jié)果，例如需要10^3個(gè)拷貝,。如果樣品中的支原體數(shù)量低于一步法試劑盒的檢測(cè)閾值,，就可能出現(xiàn)PCR陽性而一步法陰性的情況。
2. 檢測(cè)范圍：PCR檢測(cè)可以針對(duì)特定的支原體序列設(shè)計(jì)引物,，如果樣品中的支原體種類或序列與一步法試劑盒的檢測(cè)范圍不完全匹配,，可能導(dǎo)致一步法檢測(cè)不出,。
3. 樣品處理和提取：一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能對(duì)樣品的處理和DNA提取有特定的要求,。如果樣品處理不當(dāng)或DNA提取效率不高,，可能會(huì)影響一步法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果。
4. 試劑盒特異性：一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能設(shè)計(jì)用于檢測(cè)特定的支原體種類,，如果樣品中的支原體與試劑盒的特異性不匹配,，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
5. 抑制物的影響：PCR檢測(cè)可能對(duì)樣品中的某些抑制物不那么敏感,，而一步法恒溫檢測(cè)試劑盒可能更容易受到這些抑制物的影響,，從而降低檢測(cè)的靈敏度。
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在CYTOCH的理念中,，化學(xué)與生物的結(jié)合是提升產(chǎn)品性能的關(guān)鍵,。化學(xué)技術(shù)的進(jìn)步為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域提供了更多的可能性,，使得相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為靈敏,、準(zhǔn)確。為了在細(xì)胞研究領(lǐng)域取得技術(shù)性突破,，CYTOCH研發(fā)團(tuán)隊(duì)不斷嘗試將新型的化學(xué)技術(shù)與生物技術(shù)相融合,。CYTOCH在細(xì)胞領(lǐng)域所進(jìn)行的已有技術(shù)的持續(xù)突破、新技術(shù)的創(chuàng)新研發(fā),、化學(xué)與生物技術(shù)的不斷碰撞結(jié)合,，使得CYTOCH產(chǎn)品在臨床診斷、藥物研發(fā)和科研教育等領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用前景,。

在保證研發(fā)驅(qū)動(dòng)力的前提下,，為確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定與可靠以及產(chǎn)品的使用性，CYTOCH對(duì)原料供應(yīng)商進(jìn)行嚴(yán)格審計(jì)和把關(guān),，選擇品質(zhì)優(yōu)良的原料進(jìn)行后續(xù)產(chǎn)品生產(chǎn),。 在生產(chǎn)過程中，CYTOCH對(duì)生產(chǎn)人員資質(zhì),、生產(chǎn)環(huán)境,、生產(chǎn)過程、生產(chǎn)物料進(jìn)行嚴(yán)格把控,。后續(xù)的產(chǎn)品質(zhì)檢,、入庫出庫均嚴(yán)格按照企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)由質(zhì)量和倉庫物流人員進(jìn)行層層把關(guān)，確保每一批出廠產(chǎn)品質(zhì)量都處于行業(yè)前端水平,。

標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀