支原體是細胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性,，有球形,、桿形、絲形,、分枝狀等多種態(tài),。
1、支原體存在于我們周圍,，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2,、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細胞的污染發(fā)生率高,，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右,。同時又非常隱秘，早期不容易被發(fā)現(xiàn),，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒,。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器,，并且在實驗室內(nèi)會潛在的擴散,。支原體污染使得用被污染的細胞樣本做的實驗完全失去意義和價值,。
支原體去除的原理是什么？蘇州細胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
預(yù)防細胞培養(yǎng)過程中的支原體污染至關(guān)重要,，因為一旦發(fā)生污染,，可能會嚴重影響實驗結(jié)果和細胞的生長。以下是一些有效的預(yù)防措施：
1. 無菌操作：始終在無菌條件下進行細胞培養(yǎng)操作,，包括使用無菌的移液器,、手套和其他實驗室器材。
2. 個人防護：穿戴適當?shù)膫€人防護裝備,，如實驗服,、手套和口罩，以減少污染的風(fēng)險,。
3. 細胞培養(yǎng)室的清潔：保持實驗室和細胞培養(yǎng)室的清潔,，定期進行消毒處理。
4. 培養(yǎng)箱的維護：定期清潔和消毒CO2培養(yǎng)箱,，避免飛濺和溢出,，并維持嚴格的清潔計劃。
5. 使用無支原體污染的試劑：使用經(jīng)過檢測確認無支原體污染的培養(yǎng)基,、血清和其他添加物,。
6. 細胞的檢測：定期對細胞進行支原體污染的檢測，尤其是在引入新的細胞系或傳代細胞之前,。
7. 培養(yǎng)基和試劑的過濾：使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾所有細胞培養(yǎng)用液體,，以阻止支原體的通過。
8. 使用抗*素預(yù)防：雖然抗*素不能作為常規(guī)預(yù)防手段,，但在某些情況下,，可以考慮使用抗*素作為預(yù)防措施，尤其是在高風(fēng)險操作中,。
杭州細胞支原體檢測方法LAMP法支原體去除試劑會影響細胞的生長狀態(tài)嘛,？
支原體去除試劑使用后，對支原體的檢測可能會有影響,。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結(jié)合,、改變支原體膜的通透性來殺死支原體，而對真核細胞幾乎沒有影響,。然而,，某些情況下，去除試劑可能會對細胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響,，尤其是在去除劑作用期間,。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會導(dǎo)致細胞再次被支原體污染,。
需要注意的是,，某些支原體去除試劑可能會在去除支原體的過程中導(dǎo)致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA,，這可能會在隨后的支原體核酸檢測中引起假陽性結(jié)果,。因此，在去除支原體后,，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細胞后再進行支原體檢測,，以確保檢測結(jié)果的準確性。
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方法
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靈敏度
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優(yōu)勢
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劣勢
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培養(yǎng)法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標準
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ü 費勞力
ü 耗時長
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
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ü 費時
ü 需要細胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀,，易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價格略高
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ü 可檢測的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費勞力
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生物發(fā)光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實驗操作時間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
支原體的檢測方法有哪些,？
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細胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況：
1. 生長速度變慢：支原體污染的細胞生長速度可能會減慢，甚至停止生長,。
2. 形態(tài)改變：部分細胞可能會變圓,，從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細胞在支原體污染后,，形態(tài)變化可能不明顯,，但有些細胞可能會出現(xiàn)體積增大、細胞碎片增多等現(xiàn)象,。
3. 培養(yǎng)液pH變化：支原體污染的細胞可能導(dǎo)致培養(yǎng)液pH值變化明顯,，更換培養(yǎng)液后幾小時內(nèi)變酸（顏色變黃）。
4. 細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積：在某些情況下,，細胞與細胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積,，影響細胞的正常生長和傳代。
5. 細胞功能受損：支原體污染可能會影響細胞的代謝和功能,，如影響細胞蛋白質(zhì),、DNA、RNA的合成,。
6. 染色體畸變：支原體污染可能會導(dǎo)致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少,，出現(xiàn)雙著絲點染色體,、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細胞產(chǎn)量受影響：對于巨噬細胞等免疫細胞的培養(yǎng),，支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性,。
8. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：污染的細胞可能成為實驗室的污染源，影響工作區(qū)域,、培養(yǎng)箱和液氮罐等,。
9. 實驗結(jié)果的不確定性：使用被支原體污染的細胞進行實驗可能會得到不準確的結(jié)果，影響科研的可靠性。
支原體污染和黑膠蟲污染有什么區(qū)別,？杭州細胞培養(yǎng)支原體去除現(xiàn)貨
細胞庫支原體檢測的必要性,？蘇州細胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測試劑盒各有優(yōu)缺點，具體哪個更好要根據(jù)實驗需求和條件來決定,。
1. 巢式PCR法通過兩輪PCR擴增來提高檢測的特異性和靈敏度,。它的優(yōu)點是：
2. 特異性強，可以減少假陽性結(jié)果,。
3. 靈敏度高,，可以檢測到很低數(shù)量的支原體。
4. 通過設(shè)計多對引物,，可以覆蓋多種支原體種類,。
不過巢式PCR法也存在一些缺點：
1. 操作復(fù)雜，需要兩輪PCR反應(yīng),。
2. 容易受到PCR抑制物的影響,，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 反應(yīng)后需要開蓋電泳檢測,，增加了污染的風(fēng)險,。
而一步法恒溫支原體檢測試劑盒采用等溫擴增技術(shù)，具有以下優(yōu)點：
1. 操作簡便,，只需一次反應(yīng)即可完成檢測,。
2. 靈敏度和特異性也很高，可檢出10個拷貝以上的支原體污染,。
3. 反應(yīng)后無需開蓋,，減少了污染的風(fēng)險。
但一步法試劑盒的缺點是：
1. 靈敏度雖高,，但可能略低于巢式PCR法,。
2. 價格可能比巢式PCR試劑盒要高。
蘇州細胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨
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