杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法

來源：發(fā)布時(shí)間：2024-06-20

支原體的預(yù)防可通過以下方式：

1. 控制污染源：通過定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在,，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。

2. 改善無菌操作技術(shù)：通過提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí),，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染,。

3. 使用無菌設(shè)備和耗材：使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材，如無菌培養(yǎng)基,、血清等,，減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。

4. 定期消毒和清潔：對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,，包括工作臺(tái),、培養(yǎng)箱等，以減少支原體的潛在污染,。

5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對(duì)支原體的預(yù)防性試劑,，如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺(tái)噴霧,、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等,，以預(yù)防支原體污染。

6. 提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)：通過科普教育和培訓(xùn),，提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí),。

7. 建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程，包括樣本處理,、廢物處理,、設(shè)備維護(hù)等，以降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),。

支原體污染的來源有哪些,？杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法

支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個(gè)階段：

1. 支原體檢測(cè)：在進(jìn)行去除之前，首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染,。這可以通過多種方法實(shí)現(xiàn),，如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法,。

2. 選擇合適的去除試劑：一旦確認(rèn)存在支原體污染,，需要選擇一種有效的去除試劑。

3. 去除試劑的添加：根據(jù)去除試劑的說明書,，將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中,。通常，這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,。

4. 孵育：添加去除試劑后,，將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時(shí)間和條件（如溫度,、CO2濃度）應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整,。

5. 監(jiān)測(cè)去除效果：在孵育過程中，定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果,。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài),、生長速率的變化,，以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。

6. 后續(xù)檢測(cè)：去除過程完成后,，再次使用支原體檢測(cè)方法確認(rèn)污染是否已被成功,。

杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法支原體去除之后對(duì)細(xì)胞檢測(cè)有無影響？

支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)污染,，它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別：

支原體污染：在相差顯微鏡下,，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。

黑膠蟲污染：在高倍鏡下,，被黑膠蟲污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清,，邊界不清晰，有粗糙感,。

污染的影響：

支原體污染：可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢,，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細(xì)胞的DNA,、RNA及蛋白表達(dá),。

黑膠蟲污染：與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長，開始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒有什么影響,，但當(dāng)數(shù)量多時(shí),，細(xì)胞生長會(huì)受到影響直至死亡。

污染的來源：

支原體污染：可能來源于工作環(huán)境的污染,、操作者本身,、培養(yǎng)基的污染、交叉污染,、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染以及用來制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染,。

黑膠蟲污染：可能來源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染，也可能通過培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染,。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：

1. 抗*素治*：使用針對(duì)支原體有效的抗*素，如四環(huán)素類,、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等,。根據(jù)搜索結(jié)果,，可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml,，四環(huán)素10ug/ml,，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時(shí)后再換入常規(guī)培養(yǎng)液,。

2. 加溫處理：支原體不耐熱,，可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時(shí)以殺滅支原體,。但需注意，高溫也可能對(duì)細(xì)胞造成傷害,，因此需要預(yù)先確定對(duì)細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間,。

3. 使用支原體清除劑：市場(chǎng)上有專門的支原體清除劑，按照產(chǎn)品說明使用,。

4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基,，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分，可以抑制支原體生長并挽救珍貴細(xì)胞,。

5. 物理方法：一些實(shí)驗(yàn)室采用過濾的方法,，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑，以阻止支原體的侵入,。

6. 細(xì)胞傳代：在一些情況下,，通過細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。

支原體去除試劑會(huì)影響細(xì)胞的生長狀態(tài)嘛,？

細(xì)胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測(cè)的原因主要有以下幾點(diǎn)：

1. 支原體污染率高：常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計(jì)在15-35%之間,。

2. 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果：支原體污染會(huì)嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度，影響培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和生理特征,。

3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)：支原體是極小的細(xì)菌,，其細(xì)胞膜周圍沒有細(xì)胞壁，無法用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到,。

4. 難以消滅：支原體能夠迅速滲透整個(gè)實(shí)驗(yàn)室,，一旦污染很難徹底消滅。

5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,，監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦檢測(cè)所有細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體,。

6. 保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性：定期進(jìn)行支原體檢測(cè)和去除，確保無支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi),，才能獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟？細(xì)胞支原體去除貨期

支原體檢測(cè)方法qPCR法的應(yīng)用,。杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法

支原體去除試劑使用后,，對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結(jié)合,、改變支原體膜的通透性來殺死支原體,，而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒有影響。然而,，某些情況下,，去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外,，如果去除劑的效果不徹底,，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。

需要注意的是,，某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過程中導(dǎo)致支原體膜溶解,，從而釋放出支原體的DNA，這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測(cè)中引起假陽性結(jié)果,。因此,，在去除支原體后，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測(cè),，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。

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