細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結果產生多方面的影響,,具體包括:
1. 細胞生長受影響:支原體污染可能導致細胞生長速度減慢,甚至停滯,。
2. 細胞形態(tài)改變:支原體感*的細胞可能會出現形態(tài)的改變,,如細胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等,。
3. 細胞功能改變:支原體污染會影響細胞的代謝,、增殖、分化等生理功能,。
4. 細胞產物改變:支原體感*可能影響細胞產生的蛋白質,、細胞因子等生物活性物質的表達和分泌。
5. 實驗結果不準確:支原體污染會干擾實驗結果的準確性,,導致實驗數據不可靠,。
6. 實驗重復性差:支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大,影響實驗的重復性,。
7. 影響后續(xù)實驗:支原體污染的細胞培養(yǎng)產物用于后續(xù)實驗,,如轉染、基因編輯等,,可能會影響實驗效果,。
8. 影響細胞培養(yǎng)產物的質量:支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產物的質量,如疫苗,、生物制品等,。
9. 增加研究成本:支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復實驗,。
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支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面:
1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如,含有喹諾酮類,、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內酯類抗*素的混合制劑,,這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。
2. 破壞細胞膜:支原體去除劑中的抑菌肽(AMPs)成分通過破壞支原體細胞膜的完整性,,導致支原體細胞死亡,。
3. 抑制DNA復制:支原體去除劑通過抑制支原體DNA回旋酶活性,有效抑制支原體DNA的復制,,從遺傳物質著手徹底殺滅支原體,。
4. 協同作用:某些支原體去除劑利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的協同作用來除去支原體,穿膜肽能夠幫助抑菌肽更有效地穿透細胞膜,,增強其殺滅支原體的能力,。
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支原體預防的主要成分通常是指用于預防支原體污染的抗*素或化學試劑,。在細胞培養(yǎng)中,,預防支原體污染的措施包括在培養(yǎng)基中添加抗*素,以及采取其他預防措施來保持實驗室環(huán)境的清潔和無菌操作,。以下是一些用于預防支原體污染的主要成分:
1. 四環(huán)素類抗*素:這類抗*素對支原體具有抑制作用,,常用于治*和預防支原體感*。
2. 大環(huán)內酯類抗*素:例如羅紅霉素,、克拉霉素,、阿奇霉素等,用于治*肺炎支原體感*,。
3. 喹諾酮類藥物:如氧氟沙星,、司帕沙星等,也用于治*肺炎支原體感*,。
4. 其他抗*素:例如氨基糖苷類,、氯霉素等,對支原體有較小的抑制作用,。
支原體污染一旦發(fā)生,,不僅對細胞培養(yǎng)造成嚴重影響,甚至可能導致實驗結果失真,。而且支原體污染在細胞培養(yǎng)實驗中相當常見,。因此,預防措施是確保細胞培養(yǎng)環(huán)境和實驗結果可靠性的重要手段,。
01/ 良好的無菌技術及實驗操作,,保證操作不會引入新的污染
02/ 保持實驗空間的清潔
03/ 確保從可靠的來源獲取細胞,減少不同細胞之間的交叉?zhèn)魅?/span>
04/ 防止交叉污染
05/ 減少氣溶膠生成
06/ 謹慎使用抗*素
07/ 定期支原體篩查
08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細胞
09/ 保持良好的記錄
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細胞庫支原體檢測的必要性主要體現在以下幾個方面:
1. 確保細胞庫的質量與安全性:細胞庫的建立需要為生物制品的生產提供檢定合格,、質量相同,、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細胞。支原體檢測是確保細胞庫中細胞質量的重要環(huán)節(jié),。
2. 符合監(jiān)管要求:支原體檢測是生物制品安全性監(jiān)管的一部分,,全球范圍內的藥典,、法規(guī)和指導文件中都有支原體檢測的相關說明,。
3. 避免對生物制品的影響:支原體污染可能會影響生物制品的安全性和有效性,因此需要通過檢測來避免這種風險,。
4. 維護細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性:支原體是真核細胞和干細胞培養(yǎng)中最常見的問題之一,,它們可以改變細胞的代謝、減緩增殖速度,,甚至引起染色體畸變,。
5. 預防交叉污染:由于支原體可以通過氣溶膠和微粒污染實驗室其他區(qū)域,支原體檢測有助于預防交叉污染的發(fā)生,。
6. 保障數據的可靠性:支原體污染可能會影響實驗結果的準確性,,因此定期進行支原體檢測有助于保障研究數據的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測的重要性:支原體應成為細胞培養(yǎng)實驗室的常規(guī)監(jiān)測項目,,以確保細胞培養(yǎng)的質量和安全,。
8. 遵守藥典規(guī)定:根據中國藥典的規(guī)定,每8~12代細胞培養(yǎng)物應進行支原體檢查,,以符合規(guī)定,。
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支原體污染是細胞培養(yǎng)中普遍的問題之一,,細胞庫中或正在使用的細胞中,支原體的污染率約為15%-35%,。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響:
01/ 爭奪營養(yǎng):支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖
02/ 改變蛋白質,、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導和形態(tài)
04/ 損害膜和細胞器
05/ 導致突變和染色體變化
06/ 時間,、金錢和有價值的細胞丟失:支原體的污染會導致嚴重的經濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結果的不可靠性
08/ 生物安全問題
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