支原體污染的來(lái)源主要包括以下幾個(gè)方面：
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中可能存在支原體污染源,，如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等,。
2. 實(shí)驗(yàn)操作人員的手部,、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體，造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染,。
3. 培養(yǎng)基,、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染,，也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染,。
4. 細(xì)胞交叉污染,，即使用已受污染的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，可能會(huì)污染其他細(xì)胞,。
5. 實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染,，如未徹底消毒滅菌的實(shí)驗(yàn)器材,。
6. 人體是某些支原體的正常菌群,，因此操作人員的疏失也可能成為污染源,。
7. 細(xì)胞庫(kù)管理不善,，造成實(shí)驗(yàn)室間的相互污染。
8. 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)菌,、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見,，必須通過(guò)特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)
支原體檢測(cè)假陽(yáng)性的原因？深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除試劑
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染,，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：
1. 抗*素治*：使用針對(duì)支原體有效的抗*素,，如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類,、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果,，可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環(huán)素10ug/ml,，卡那霉素50ug/ml,，并維持24-48小時(shí)后再換入常規(guī)培養(yǎng)液,。
2. 加溫處理：支原體不耐熱,，可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時(shí)以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對(duì)細(xì)胞造成傷害,，因此需要預(yù)先確定對(duì)細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間。
3. 使用支原體清除劑：市場(chǎng)上有專門的支原體清除劑,，按照產(chǎn)品說(shuō)明使用,。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基,，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分,，可以抑制支原體生長(zhǎng)并挽救珍貴細(xì)胞。
5. 物理方法：一些實(shí)驗(yàn)室采用過(guò)濾的方法,，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過(guò)濾培養(yǎng)基和試劑,，以阻止支原體的侵入。
6. 細(xì)胞傳代：在一些情況下,，通過(guò)細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度,。
北京細(xì)胞支原體預(yù)防現(xiàn)貨支原體檢測(cè)方法qPCR法？
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方法
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靈敏度
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優(yōu)勢(shì)
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劣勢(shì)
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培養(yǎng)法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標(biāo)準(zhǔn)
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ü 費(fèi)勞力
ü 耗時(shí)長(zhǎng)
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽(yáng)性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測(cè)
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ü 費(fèi)時(shí)
ü 需要細(xì)胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀,，易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價(jià)格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測(cè)支原體種屬
ü 價(jià)格略高
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ü 可檢測(cè)的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
ü 費(fèi)勞力
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生物發(fā)光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽(yáng)性可能性
ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽(yáng)性可能性
ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無(wú)需DNA提取
ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽(yáng)性可能性
ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性
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支原體是細(xì)胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,，大小一般在0.2~0.5um之間,，呈高度多形性，有球形,、桿形,、絲形、分枝狀等多種態(tài),。
1,、支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2,、可透過(guò)一般的濾膜,，所以不要寄希望于過(guò)濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高，據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右,。同時(shí)又非常隱秘,，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測(cè)試劑盒,。支原體因?yàn)閭€(gè)頭小,，能穿過(guò)0.22微米濾器，并且在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會(huì)潛在的擴(kuò)散,。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實(shí)驗(yàn)完全失去意義和價(jià)值,。
支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟？
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響,，具體包括：
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)受影響：支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢,，甚至停滯。
2. 細(xì)胞形態(tài)改變：支原體感*的細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)的改變,，如細(xì)胞體積增大,、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細(xì)胞功能改變：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝,、增殖,、分化等生理功能,。
4. 細(xì)胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)的表達(dá)和分泌,。
5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確：支原體污染會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差：支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)批次間差異大,，影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,。
7. 影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)：支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如轉(zhuǎn)染,、基因編輯等,，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。
8. 影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,，如疫苗,、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費(fèi)額外的時(shí)間和成本進(jìn)行檢測(cè),、處理和重復(fù)實(shí)驗(yàn),。
支原體去除之后對(duì)細(xì)胞檢測(cè)有無(wú)影響？杭州支原體檢測(cè)方法恒溫?cái)U(kuò)增
一步法支原體檢測(cè)試劑盒怎么防污染,？深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除試劑
預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體污染至關(guān)重要,，因?yàn)橐坏┌l(fā)生污染，可能會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和細(xì)胞的生長(zhǎng),。以下是一些有效的預(yù)防措施：
1. 無(wú)菌操作：始終在無(wú)菌條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作,，包括使用無(wú)菌的移液器、手套和其他實(shí)驗(yàn)室器材,。
2. 個(gè)人防護(hù)：穿戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備,，如實(shí)驗(yàn)服、手套和口罩,，以減少污染的風(fēng)險(xiǎn),。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔：保持實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔，定期進(jìn)行消毒處理,。
4. 培養(yǎng)箱的維護(hù)：定期清潔和消毒CO2培養(yǎng)箱,，避免飛濺和溢出，并維持嚴(yán)格的清潔計(jì)劃,。
5. 使用無(wú)支原體污染的試劑：使用經(jīng)過(guò)檢測(cè)確認(rèn)無(wú)支原體污染的培養(yǎng)基,、血清和其他添加物。
6. 細(xì)胞的檢測(cè)：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體污染的檢測(cè),，尤其是在引入新的細(xì)胞系或傳代細(xì)胞之前,。
7. 培養(yǎng)基和試劑的過(guò)濾：使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過(guò)濾所有細(xì)胞培養(yǎng)用液體，以阻止支原體的通過(guò)。
8. 使用抗*素預(yù)防：雖然抗*素不能作為常規(guī)預(yù)防手段,，但在某些情況下,，可以考慮使用抗*素作為預(yù)防措施，尤其是在高風(fēng)險(xiǎn)操作中,。
深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除試劑
