LAMP法,，即環(huán)介導等溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification），是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法,。它由日本學者Notomi于2000年開發(fā),。LAMP法檢測有以下特性：
快速高效：LAMP技術可以在1小時內把幾拷貝的目的序列迅速擴增到10^9^～10^10^拷貝，擴增效率高,。
簡便性：LAMP技術不需要進行模板的預變性,，減少了PCR技術升降溫帶來的影響以及對昂貴,、精密實驗儀器的要求，同時擴增效率高,，可以在較短時間內完成檢測,。
LAMP法因其快速、高效,、特異,、靈敏和經濟等優(yōu)點，已經應用于病原菌,、寄生蟲,、病毒、疾病和轉基因產品檢測等領域,，并且還將廣泛應用于臨床診斷,、環(huán)境監(jiān)測、食源安全等領域,，具有更為廣闊的發(fā)展應用前景,。
細胞培養(yǎng)過程中支原體污染怎么預防？細胞支原體檢測試劑廠家
支原體檢測的樣本既可以是細胞,，也可以是培養(yǎng)基,。在細胞培養(yǎng)中，支原體污染是常見的問題,，因此需要對細胞和培養(yǎng)基進行檢測,。細胞庫、病毒種子批,、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查,，這通常包括培養(yǎng)法和指示細胞培養(yǎng)法（DNA染色法）。同時,，病毒類疫苗的病毒收獲液,、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體，必要時,，也可以采用指示細胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基,。
此外，支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,，這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體,。在進行支原體檢測時，需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上,。
因此,，支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養(yǎng)基,，具體取決于檢測的目的和方法,。
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支原體的預防可通過以下方式：
1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細胞培養(yǎng)體系內無支原體存在,，從而獲得準確有效的實驗數據,。
2. 改善無菌操作技術：通過提高實驗人員的操作技術和意識，避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染,。
3. 使用無菌設備和耗材：使用無菌的細胞培養(yǎng)設備和耗材,，如無菌培養(yǎng)基、血清等,，減少支原體污染的風險,。
4. 定期消毒和清潔：對實驗室環(huán)境進行定期的消毒和清潔，包括工作臺,、培養(yǎng)箱等,，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預防性試劑：使用專門針對支原體的預防性試劑,，如加入細胞培養(yǎng)基中的預防劑,、超凈臺噴霧、水浴鍋預防和細胞培養(yǎng)箱水盤預防等,，以預防支原體污染,。
6. 提高實驗室人員對支原體污染的認識：通過科普教育和培訓，提高實驗室人員對支原體污染的認識和預防意識,。
7. 建立嚴格的實驗室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴格的實驗室管理規(guī)程,，包括樣本處理、廢物處理,、設備維護等,，以降低支原體污染的風險。
細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結果產生多方面的影響,，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢,，甚至停滯。
2. 細胞形態(tài)改變：支原體感*的細胞可能會出現形態(tài)的改變,，如細胞體積增大,、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝,、增殖,、分化等生理功能。
4. 細胞產物改變：支原體感*可能影響細胞產生的蛋白質,、細胞因子等生物活性物質的表達和分泌,。
5. 實驗結果不準確：支原體污染會干擾實驗結果的準確性，導致實驗數據不可靠。
6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大,，影響實驗的重復性,。
7. 影響后續(xù)實驗：支原體污染的細胞培養(yǎng)產物用于后續(xù)實驗，如轉染,、基因編輯等，可能會影響實驗效果,。
8. 影響細胞培養(yǎng)產物的質量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產物的質量,，如疫苗、生物制品等,。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測,、處理和重復實驗。
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支原體污染是細胞培養(yǎng)中普遍的問題之一,，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%,。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖
02/ 改變蛋白質,、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導和形態(tài)
04/ 損害膜和細胞器
05/ 導致突變和染色體變化
06/ 時間,、金錢和有價值的細胞丟失：支原體的污染會導致嚴重的經濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結果的不可靠性
08/ 生物安全問題
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細胞培養(yǎng)中支原體預防措施。細胞支原體檢測試劑廠家
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方法
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靈敏度
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優(yōu)勢
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劣勢
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培養(yǎng)法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標準
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ü 費勞力
ü 耗時長
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
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ü 費時
ü 需要細胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀,，易判讀結果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價格略高
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ü 可檢測的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費勞力
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生物發(fā)光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結果
ü 無法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實驗操作時間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
細胞支原體檢測試劑廠家
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