LAMP法,，即環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification）,，是一種在恒定溫度下進(jìn)行的核酸擴(kuò)增方法。它由日本學(xué)者Notomi于2000年開發(fā),。LAMP法檢測有以下特性：
快速高效：LAMP技術(shù)可以在1小時(shí)內(nèi)把幾拷貝的目的序列迅速擴(kuò)增到10^9^～10^10^拷貝,，擴(kuò)增效率高,。
簡便性：LAMP技術(shù)不需要進(jìn)行模板的預(yù)變性，減少了PCR技術(shù)升降溫帶來的影響以及對昂貴,、精密實(shí)驗(yàn)儀器的要求,，同時(shí)擴(kuò)增效率高，可以在較短時(shí)間內(nèi)完成檢測,。
LAMP法因其快速,、高效、特異,、靈敏和經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),，已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲,、病毒,、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測等領(lǐng)域，并且還將廣泛應(yīng)用于臨床診斷,、環(huán)境監(jiān)測,、食源安全等領(lǐng)域，具有更為廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景,。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體污染怎么預(yù)防,？細(xì)胞支原體檢測試劑廠家
支原體檢測的樣本既可以是細(xì)胞，也可以是培養(yǎng)基,。在細(xì)胞培養(yǎng)中,，支原體污染是常見的問題，因此需要對細(xì)胞和培養(yǎng)基進(jìn)行檢測。細(xì)胞庫,、病毒種子批,、對照細(xì)胞以及臨床用細(xì)胞等都需要進(jìn)行支原體檢查，這通常包括培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法（DNA染色法）,。同時(shí),，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養(yǎng)法檢查支原體,，必要時(shí),，也可以采用指示細(xì)胞培養(yǎng)法篩選培養(yǎng)基。
此外,，支原體檢測的培養(yǎng)基推薦使用支原體肉湯培養(yǎng)基和精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,，這些培養(yǎng)基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進(jìn)行支原體檢測時(shí),，需要取培養(yǎng)物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上,。
因此，支原體檢測的樣本既可以是細(xì)胞,，也可以是培養(yǎng)基,，具體取決于檢測的目的和方法。
深圳細(xì)胞支原體預(yù)防貨期支原體檢測假陽性的原因,？
支原體的預(yù)防可通過以下方式：
1. 控制污染源：通過定期檢測和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。
2. 改善無菌操作技術(shù)：通過提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí),，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染。
3. 使用無菌設(shè)備和耗材：使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,，如無菌培養(yǎng)基,、血清等，減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),。
4. 定期消毒和清潔：對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,，包括工作臺(tái)、培養(yǎng)箱等,，以減少支原體的潛在污染,。
5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對支原體的預(yù)防性試劑，如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑,、超凈臺(tái)噴霧,、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等，以預(yù)防支原體污染,。
6. 提高實(shí)驗(yàn)室人員對支原體污染的認(rèn)識(shí)：通過科普教育和培訓(xùn),，提高實(shí)驗(yàn)室人員對支原體污染的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí)。
7. 建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程，包括樣本處理,、廢物處理,、設(shè)備維護(hù)等，以降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),。
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響,，具體包括：
1. 細(xì)胞生長受影響：支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞生長速度減慢，甚至停滯,。
2. 細(xì)胞形態(tài)改變：支原體感*的細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)的改變,，如細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等,。
3. 細(xì)胞功能改變：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝,、增殖、分化等生理功能,。
4. 細(xì)胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)的表達(dá)和分泌,。
5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確：支原體污染會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差：支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)批次間差異大,，影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,。
7. 影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)：支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如轉(zhuǎn)染,、基因編輯等,，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。
8. 影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,，如疫苗,、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費(fèi)額外的時(shí)間和成本進(jìn)行檢測,、處理和重復(fù)實(shí)驗(yàn),。
一步法支原體檢測試劑盒怎么防污染？
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍的問題之一,，細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中,，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會(huì)阻礙細(xì)胞生長和增殖
02/ 改變蛋白質(zhì),、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達(dá),、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài)
04/ 損害膜和細(xì)胞器
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化
06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失：支原體的污染會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失以及研究時(shí)間損失
07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性
08/ 生物安全問題
支原體污染如何預(yù)防,？深圳細(xì)胞支原體預(yù)防貨期
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體預(yù)防措施,。細(xì)胞支原體檢測試劑廠家
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方法
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靈敏度
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優(yōu)勢
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劣勢
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培養(yǎng)法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金標(biāo)準(zhǔn)
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ü 費(fèi)勞力
ü 耗時(shí)長
ü 需要特定的培養(yǎng)基
ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 可能假陽性可能性
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間接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易檢測
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ü 費(fèi)時(shí)
ü 需要細(xì)胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客觀，易判讀結(jié)果
ü 可以鑒別支原體種屬
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ü 受抗體限制
ü 價(jià)格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可檢測支原體種屬
ü 價(jià)格略高
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ü 可檢測的支原體種屬有限
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放射自顯影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
ü 費(fèi)勞力
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生物發(fā)光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 難以判讀結(jié)果
ü 無法鑒別支原體種屬
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特異性
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特異性
ü 結(jié)果可靠
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 無需DNA提取
ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間
ü 具有特異性
ü 高通量
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ü 可能假陽性可能性
ü 檢測特異性依賴引物特異性
細(xì)胞支原體檢測試劑廠家
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