北京細(xì)胞支原體檢測(cè)方法等溫?cái)U(kuò)增

來(lái)源：發(fā)布時(shí)間：2024-08-12

方法	靈敏度	優(yōu)勢(shì)	劣勢(shì)
培養(yǎng)法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金標(biāo)準(zhǔn)	ü 費(fèi)勞力 ü 耗時(shí)長(zhǎng) ü 需要特定的培養(yǎng)基 ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能難以判讀結(jié)果 ü 無(wú)法鑒別支原體種屬 ü 可能假陽(yáng)性可能性
間接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易檢測(cè)	ü 費(fèi)時(shí) ü 需要細(xì)胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客觀，易判讀結(jié)果 ü 可以鑒別支原體種屬	ü 受抗體限制 ü 價(jià)格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可檢測(cè)支原體種屬 ü 價(jià)格略高	ü 可檢測(cè)的支原體種屬有限
放射自顯影	☆☆	ü 迅速	ü 難以判讀結(jié)果 ü 無(wú)法鑒別支原體種屬 ü 費(fèi)勞力
生物發(fā)光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 難以判讀結(jié)果 ü 無(wú)法鑒別支原體種屬
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特異性	ü 可能假陽(yáng)性可能性 ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特異性 ü 結(jié)果可靠 ü 高通量	ü 可能假陽(yáng)性可能性 ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 無(wú)需DNA提取 ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間 ü 具有特異性 ü 高通量	ü 可能假陽(yáng)性可能性 ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性支原體檢測(cè)方法qPCR法的應(yīng)用,。北京細(xì)胞支原體檢測(cè)方法等溫?cái)U(kuò)增

LAMP法,，即環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法（Loop-mediated isothermal amplification），在支原體檢測(cè)中的應(yīng)用具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用場(chǎng)景：

1. 日常監(jiān)測(cè)：由于LAMP法的快速和簡(jiǎn)便性,，它適用于生物實(shí)驗(yàn)室的日常監(jiān)測(cè),，可以及時(shí)檢測(cè)出支原體的存在，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。

2. 疾病診斷：LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS,、禽流感、HIV等疾病的檢測(cè)中,，并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用,。

3. 臨床應(yīng)用：LAMP法在臨床樣本的檢測(cè)中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性,，可以用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室樣本及臨床樣本中的支原體,。

4. 多病原體檢測(cè)：LAMP法可以同時(shí)檢測(cè)多種病原體，包括肺炎支原體在內(nèi)的多種下呼吸道感*的病原體,，為臨床診療提供詢證依據(jù),。

5. 與其他技術(shù)結(jié)合：LAMP法可以與CRISPR-Cas12a等其他技術(shù)結(jié)合，建立新的檢測(cè)方法,，提高檢測(cè)的效率和準(zhǔn)確性,。

溫州細(xì)胞支原體去除試劑細(xì)胞被支原體污染了會(huì)有什么影響？

細(xì)胞培養(yǎng)中,，需要去除支原體的污染：支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍的問(wèn)題之一,，細(xì)胞庫(kù)中或正在使用的細(xì)胞中,，支原體的污染率約為15%-35%。并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響：

01/ 爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖

02/ 改變蛋白質(zhì),、RNA 或 DNA 合成的水平

03/ 改變基因表達(dá),、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài)

04/ 損害膜和細(xì)胞器

05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化

06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失,，耽誤研究時(shí)間

07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性降低

08/ 生物安全問(wèn)題

對(duì)于同一個(gè)樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,，而PCR檢測(cè)為陰性,，可能的原因包括：

1. 檢測(cè)的支原體種類不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測(cè)的支原體種類更多，例如可以涵蓋27種支原體,，而PCR檢測(cè)可能只針對(duì)常見(jiàn)的12種支原體進(jìn)行檢測(cè),。因此，如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測(cè)的范圍內(nèi),，就可能出現(xiàn)一步法檢測(cè)為陽(yáng)性而PCR檢測(cè)為陰性的情況,。

2. 靈敏度的差異：PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測(cè)法。PCR可以檢測(cè)到低至單個(gè)拷貝的支原體,，而一步法恒溫檢測(cè)可能需要更高的支原體拷貝數(shù),，例如10^3^個(gè)拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測(cè)的靈敏度閾值,，PCR檢測(cè)可能無(wú)法檢測(cè)到,，導(dǎo)致陰性結(jié)果。

3. 樣品中可能含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)：如果樣品中存在PCR反應(yīng)的抑制物,，可能會(huì)影響PCR的擴(kuò)增效率,，導(dǎo)致即使存在支原體，PCR檢測(cè)也可能呈現(xiàn)陰性結(jié)果,。

4. 試劑盒的特異性和交叉反應(yīng)：一步法恒溫試劑盒可能具有更高的特異性,，減少了與其他微生物的交叉反應(yīng)，從而在PCR檢測(cè)為陰性時(shí)仍能準(zhǔn)確檢測(cè)到支原體的存在,。

支原體檢測(cè)的應(yīng)用場(chǎng)景,？

巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒各有優(yōu)缺點(diǎn)，具體哪個(gè)更好要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件來(lái)決定,。

1. 巢式PCR法通過(guò)兩輪PCR擴(kuò)增來(lái)提高檢測(cè)的特異性和靈敏度,。它的優(yōu)點(diǎn)是：

2. 特異性強(qiáng)，可以減少假陽(yáng)性結(jié)果,。

3. 靈敏度高，可以檢測(cè)到很低數(shù)量的支原體,。

4. 通過(guò)設(shè)計(jì)多對(duì)引物,，可以覆蓋多種支原體種類,。

不過(guò)巢式PCR法也存在一些缺點(diǎn)：

1. 操作復(fù)雜，需要兩輪PCR反應(yīng),。

2. 容易受到PCR抑制物的影響,，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3. 反應(yīng)后需要開(kāi)蓋電泳檢測(cè),，增加了污染的風(fēng)險(xiǎn),。

而一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1. 操作簡(jiǎn)便,，只需一次反應(yīng)即可完成檢測(cè),。

2. 靈敏度和特異性也很高，可檢出10個(gè)拷貝以上的支原體污染,。

3. 反應(yīng)后無(wú)需開(kāi)蓋,，減少了污染的風(fēng)險(xiǎn)。

但一步法試劑盒的缺點(diǎn)是：

1. 靈敏度雖高,，但可能略低于巢式PCR法,。

2. 價(jià)格可能比巢式PCR試劑盒要高。

細(xì)胞培養(yǎng)為什么建議使用支原體檢測(cè),？廣州細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防

支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟,？北京細(xì)胞支原體檢測(cè)方法等溫?cái)U(kuò)增

支原體的預(yù)防可通過(guò)以下方式：

1. 控制污染源：通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在,，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。

2. 改善無(wú)菌操作技術(shù)：通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí)，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染,。

3. 使用無(wú)菌設(shè)備和耗材：使用無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,，如無(wú)菌培養(yǎng)基、血清等,，減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),。

4. 定期消毒和清潔：對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔，包括工作臺(tái),、培養(yǎng)箱等,，以減少支原體的潛在污染。

5. 使用預(yù)防性試劑：使用專門針對(duì)支原體的預(yù)防性試劑,，如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑,、超凈臺(tái)噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等,，以預(yù)防支原體污染,。

6. 提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)：通過(guò)科普教育和培訓(xùn)，提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí)。

7. 建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程,，包括樣本處理,、廢物處理、設(shè)備維護(hù)等,，以降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),。

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標(biāo)簽：支原體免疫沉淀

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