在生命科學(xué)研究的復(fù)雜版圖中,,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的解析是揭示生命奧秘的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。Co-IP 免疫沉淀(免疫共沉淀)技術(shù)作為研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,,為科研人員深入探索細(xì)胞內(nèi)分子機(jī)制提供了極為有力的工具,。Co-IP 免疫沉淀的原理基于蛋白質(zhì)之間的相互結(jié)合以及抗原 - 抗體的特異性識別。在細(xì)胞內(nèi),,許多蛋白質(zhì)并非孤立存在,,而是與其他蛋白質(zhì)形成復(fù)合物共同行使生物學(xué)功能。當(dāng)細(xì)胞裂解后,,這些蛋白質(zhì)復(fù)合物依然能夠保持相對的穩(wěn)定,。在病毒機(jī)制研究中,免疫沉淀揭示病毒蛋白與宿主蛋白關(guān)聯(lián),,為抗病毒藥物研發(fā)奠基,。廣州RIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨
之后加入固相載體,,使其與抗體結(jié)合,形成穩(wěn)固的免疫復(fù)合物,。通過離心,,將免疫復(fù)合物沉淀到離心管底部,去除上清液,,此時沉淀中就富集了目標(biāo)抗原及與之相互作用的分子,。為了提高純度,還需對沉淀進(jìn)行多次洗滌,,去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì),。,使用洗脫緩沖液將目標(biāo)抗原從免疫復(fù)合物中洗脫下來,,得到可供后續(xù)分析的樣品,。免疫沉淀技術(shù)在多個領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究中,,它能夠幫助科研人員鑒定與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的其他蛋白質(zhì),,從而揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成和功能,。上海Protein AG免疫沉淀實驗視頻蛋白質(zhì)組學(xué)研究中,,免疫沉淀可有效分離出與目標(biāo)蛋白相互作用的其他蛋白,助力機(jī)制探索,。
這些固相載體與抗體結(jié)合后,,使得抗原-抗體復(fù)合物能夠被沉淀下來,經(jīng)過離心等操作,,將沉淀與上清液分離,,再通過洗脫等步驟,即可獲得富集的目標(biāo)抗原及其相互作用的分子,。免疫沉淀的操作流程較為精細(xì),。第一步是細(xì)胞培養(yǎng)與裂解??蒲腥藛T需要根據(jù)研究目的,,選擇合適的細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長至合適狀態(tài)后,,使用特定的裂解緩沖液將細(xì)胞裂解,,釋放出細(xì)胞內(nèi)的生物分子。接著進(jìn)行抗體孵育,,將特異性抗體加入到細(xì)胞裂解液中,,在適宜的溫度和時間條件下,讓抗體與目標(biāo)抗原充分結(jié)合,。
隨后,,借助偶聯(lián)了特定抗體結(jié)合蛋白(如 Protein A 或 Protein G)的固相載體,,通過離心或磁分離等手段,就能將復(fù)合物從復(fù)雜的細(xì)胞裂解物中高效分離出來,。與其他蛋白質(zhì)分離技術(shù)相比,,免疫沉淀技術(shù)具有獨特優(yōu)勢。例如,,相較于傳統(tǒng)的親和層析,,免疫沉淀對低豐度蛋白的捕獲能力更強,能在復(fù)雜背景下精細(xì)富集目標(biāo)蛋白,。同時,,它能更好地保留蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)及相互作用關(guān)系,這對于研究蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成與功能至關(guān)重要,。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,,免疫沉淀技術(shù)發(fā)揮著關(guān)鍵作用。通過研究藥物靶點蛋白與其他蛋白的相互作用,,科學(xué)家可以深入了解藥物的作用機(jī)制,。選擇高特異性抗體是免疫沉淀成功的關(guān)鍵,確保目標(biāo)蛋白的高效捕獲與純化,。
隨后,,引入一種固相載體,如蛋白 A 或蛋白 G 偶聯(lián)的瓊脂糖珠,。這些固相載體能夠與抗體的 Fc 段結(jié)合,,從而將抗原 - 抗體復(fù)合物從溶液中沉淀下來。經(jīng)過多次洗滌步驟,,去除未結(jié)合的雜質(zhì),,通過適當(dāng)?shù)姆椒ǎ缂訜峄蛱砑酉疵摼彌_液,,將目標(biāo)分子從復(fù)合物中釋放出來,,以便后續(xù)的分析檢測。免疫沉淀技術(shù)在多個領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,。在基礎(chǔ)科研中,,它常被用于研究蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用,通過捕獲與目標(biāo)蛋白相互結(jié)合的其他蛋白,,繪制蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò),,有助于揭示細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的生物學(xué)過程。病毒研究中,,免疫沉淀可用于分離病毒抗原,,為疫苗研發(fā)提供關(guān)鍵支持。廣州Co IP免疫沉淀外包公司
該技術(shù)在疾病機(jī)制研究、藥物靶點篩選等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價值,。廣州RIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨
其具體實驗流程通常包括以下幾個關(guān)鍵步驟,。首先是細(xì)胞或組織裂解,將樣本置于合適的裂解液中,,通過物理或化學(xué)方法破碎細(xì)胞,,釋放出細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等生物分子。接著,,向裂解液中加入特異性抗體,,在適宜的條件下孵育,讓抗體與目標(biāo)蛋白充分結(jié)合形成復(fù)合物,。之后加入 Protein A/G 珠子,,再次孵育,使復(fù)合物與珠子結(jié)合,。通過離心或磁力分離,,將結(jié)合有目標(biāo)蛋白的珠子從溶液中分離出來,經(jīng)過多次洗滌去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì),。,,使用洗脫液將目標(biāo)蛋白從珠子上洗脫下來,得到純化的目標(biāo)蛋白,,可用于后續(xù)的分析檢測,。廣州RIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨