在生命科學研究的復雜版圖中,,蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡的解析是揭示生命奧秘的關鍵環(huán)節(jié)。Co-IP 免疫沉淀(免疫共沉淀)技術作為研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,,為科研人員深入探索細胞內(nèi)分子機制提供了極為有力的工具,。Co-IP 免疫沉淀的原理基于蛋白質(zhì)之間的相互結合以及抗原 - 抗體的特異性識別。在細胞內(nèi),,許多蛋白質(zhì)并非孤立存在,,而是與其他蛋白質(zhì)形成復合物共同行使生物學功能。當細胞裂解后,,這些蛋白質(zhì)復合物依然能夠保持相對的穩(wěn)定,。在病毒機制研究中,免疫沉淀揭示病毒蛋白與宿主蛋白關聯(lián),,為抗病毒藥物研發(fā)奠基,。廣州RIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨
之后加入固相載體,使其與抗體結合,,形成穩(wěn)固的免疫復合物,。通過離心,,將免疫復合物沉淀到離心管底部,去除上清液,,此時沉淀中就富集了目標抗原及與之相互作用的分子,。為了提高純度,還需對沉淀進行多次洗滌,,去除非特異性結合的雜質(zhì),。,使用洗脫緩沖液將目標抗原從免疫復合物中洗脫下來,,得到可供后續(xù)分析的樣品,。免疫沉淀技術在多個領域有著廣泛的應用。在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究中,,它能夠幫助科研人員鑒定與目標蛋白質(zhì)相互作用的其他蛋白質(zhì),,從而揭示蛋白質(zhì)復合物的組成和功能。上海Protein AG免疫沉淀實驗視頻蛋白質(zhì)組學研究中,,免疫沉淀可有效分離出與目標蛋白相互作用的其他蛋白,,助力機制探索。
這些固相載體與抗體結合后,,使得抗原-抗體復合物能夠被沉淀下來,,經(jīng)過離心等操作,將沉淀與上清液分離,,再通過洗脫等步驟,,即可獲得富集的目標抗原及其相互作用的分子。免疫沉淀的操作流程較為精細,。第一步是細胞培養(yǎng)與裂解,。科研人員需要根據(jù)研究目的,,選擇合適的細胞系進行培養(yǎng),,待細胞生長至合適狀態(tài)后,使用特定的裂解緩沖液將細胞裂解,,釋放出細胞內(nèi)的生物分子,。接著進行抗體孵育,將特異性抗體加入到細胞裂解液中,,在適宜的溫度和時間條件下,,讓抗體與目標抗原充分結合。
隨后,,借助偶聯(lián)了特定抗體結合蛋白(如 Protein A 或 Protein G)的固相載體,,通過離心或磁分離等手段,就能將復合物從復雜的細胞裂解物中高效分離出來,。與其他蛋白質(zhì)分離技術相比,,免疫沉淀技術具有獨特優(yōu)勢,。例如,相較于傳統(tǒng)的親和層析,,免疫沉淀對低豐度蛋白的捕獲能力更強,,能在復雜背景下精細富集目標蛋白。同時,,它能更好地保留蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)及相互作用關系,,這對于研究蛋白質(zhì)復合物的組成與功能至關重要。在藥物研發(fā)領域,,免疫沉淀技術發(fā)揮著關鍵作用,。通過研究藥物靶點蛋白與其他蛋白的相互作用,,科學家可以深入了解藥物的作用機制,。選擇高特異性抗體是免疫沉淀成功的關鍵,確保目標蛋白的高效捕獲與純化,。
隨后,,引入一種固相載體,如蛋白 A 或蛋白 G 偶聯(lián)的瓊脂糖珠,。這些固相載體能夠與抗體的 Fc 段結合,,從而將抗原 - 抗體復合物從溶液中沉淀下來。經(jīng)過多次洗滌步驟,,去除未結合的雜質(zhì),,通過適當?shù)姆椒ǎ缂訜峄蛱砑酉疵摼彌_液,,將目標分子從復合物中釋放出來,,以便后續(xù)的分析檢測。免疫沉淀技術在多個領域有著廣泛的應用,。在基礎科研中,,它常被用于研究蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用,通過捕獲與目標蛋白相互結合的其他蛋白,,繪制蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡,,有助于揭示細胞內(nèi)復雜的生物學過程。病毒研究中,,免疫沉淀可用于分離病毒抗原,,為疫苗研發(fā)提供關鍵支持。廣州Co IP免疫沉淀外包公司
該技術在疾病機制研究,、藥物靶點篩選等領域具有重要應用價值,。廣州RIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨
其具體實驗流程通常包括以下幾個關鍵步驟。首先是細胞或組織裂解,,將樣本置于合適的裂解液中,,通過物理或化學方法破碎細胞,,釋放出細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等生物分子。接著,,向裂解液中加入特異性抗體,,在適宜的條件下孵育,讓抗體與目標蛋白充分結合形成復合物,。之后加入 Protein A/G 珠子,,再次孵育,使復合物與珠子結合,。通過離心或磁力分離,,將結合有目標蛋白的珠子從溶液中分離出來,經(jīng)過多次洗滌去除非特異性結合的雜質(zhì),。,,使用洗脫液將目標蛋白從珠子上洗脫下來,得到純化的目標蛋白,,可用于后續(xù)的分析檢測,。廣州RIP免疫沉淀磁珠現(xiàn)貨