基因?qū)嶒炇遗cPCR實驗室的規(guī)劃布局要求:1、環(huán)境要求通風、溫度和濕度實驗室的長期使用,,有毒、有害等污濁氣體不及時排出會危害室內(nèi)操作人員健康,。實驗室良好的通風環(huán)境是必要前提。除了實驗室建筑選址的朝向和所處地域的氣候特征,,實驗室通風系統(tǒng)也是必須考慮的問題,。通風柜作為保持實驗室內(nèi)安全、衛(wèi)生的重要柜體,,是建立一個科學實驗室必不可少的組成部分,。潔凈度實驗室的潔凈,除了實驗室地面,、實驗室器具的清潔,,還要考慮實驗室內(nèi)空氣的潔凈度。不良的空氣質(zhì)量會影響實驗的正常進行,,擴散到空氣中的有害物質(zhì)也會危害到人體健康,。2,、設施要求給排水,、排污系統(tǒng)標準規(guī)范的實驗室,都會配置有供水,、排水和排污系統(tǒng),,實驗臺配置水池、滴水架,、排水槽,,通風柜與通風柜管道聯(lián)通。3,、實驗室工作人員要求PCR實驗室內(nèi)工作人員必須參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班,,并持證上崗。PCR實驗室通過驗收,,實驗室至少必須應有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”,。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標準化操作程序(SOP),、建立系列質(zhì)量管理文件等,,確保實驗室日常運行符合國家衛(wèi)生部的要求,,確保檢測結果準確、確保實驗室衛(wèi)生安全,?;诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,,復性溫度,,延伸溫度之間很好地進行控制。力康熒光定量PCR儀批發(fā)價
基因擴增實驗又稱PCR實驗,,其特點是能將微量的DNA大幅增加,,PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,應用于生物學各個領域,,例如:特定基因的檢測和診斷,,DNA指紋、個體識別,、親子鑒定及法醫(yī)物證,,動、植物檢疫,,動物及其衍生產(chǎn)品檢測,,動物飼料、化妝品,、食品衛(wèi)生檢測,,轉基因作物與轉基因微生物檢測等。PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū),、樣品制備區(qū),、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設有走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置,。不同功能的工作區(qū)應是分隔的,各工作區(qū)有明顯的標志,,不能直通,,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗,。前兩區(qū)為擴增前區(qū),,后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開,。實驗材料,、試劑、記錄紙,、筆,、清潔材料等,,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),,不得逆向流動,。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動,。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈,,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈,。力康熒光定量PCR儀批發(fā)價PCR儀被大量運用于醫(yī)學,、生物學實驗室中。
實時熒光定量pcr儀,,由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù),。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示,。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析,。實時設備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正?;幚韥韽浹a背景熒光的差異。正?;罂梢栽O定域值水平,,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。實時熒光定量pcr儀組成熒光定量系統(tǒng)和計算機作用,,監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,,數(shù)據(jù)形式顯示,通過開發(fā)的實時分析,,軟件以圖表的表現(xiàn),。實時熒光定量pcr儀優(yōu)勢:樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點的循環(huán)數(shù))。域值應設定在使指數(shù)期的擴增效率為大,,這樣可以獲得準確,可重復性的數(shù)據(jù),。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品,,線性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線,可以用來計算未知樣品的濃度,。實時熒光定量pcr儀技術原理:所謂real-timeQ-PCR技術,,是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。在real-time技術的發(fā)展過程中,,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關鍵的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),。
硬件設計:二通道(X960A)和五通道(X960B)熒光檢測系統(tǒng),,LED光源、高分辨率冷光源CCD,;所有樣品同一時刻采集熒光信號,;開放試劑、耗材平臺,,通用性極強,、全封閉樣品座設計。溫度控制系統(tǒng):模塊采用Peltier-Based技術,,擴增效率高,,非特異性好-高達5℃/s的升降溫速率, 節(jié)省用戶的時間,;高檢測靈敏度,, 小可檢測到單個模板-具有兩種溫度控制模式,即模塊溫控和模擬管控,,保證檢測的靈活性-良好的溫控均一性,,有效降低了孔間差異,確保低拷貝樣品數(shù)據(jù)的準確測試,。PCR實驗室分為四個單獨工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū),標本制備區(qū),擴增反應混合物配置和擴增區(qū),擴增產(chǎn)物分析區(qū).
在凈化車間內(nèi)工作的人員應穿著符合要求的工作服,。工作服的選材、式樣及穿戴方式應與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級別要求相適應,,并不得混用,。潔凈工作服的質(zhì)地應光滑、不產(chǎn)生靜電,、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì),。無菌工作服必須包蓋全部毛發(fā)、胡須及腳部,,并能阻留人體脫落物,。不同空氣潔凈度級別使用的工作服應當分別清洗、整理,,必要時消毒或滅菌,。工作服洗滌、滅菌時不應帶入附加的顆粒物質(zhì),。工作服應制定清洗周期,。進入各個區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,,不得將工作服帶出,。實驗室應建立、執(zhí)行人員進出潔凈區(qū)的清潔程序和管理制度,,人員清潔程序合理,。實驗室需要至少配備兩名專業(yè)實驗員,能夠處理樣品,、提取核酸及核酸擴增,,熟練掌握超凈工作臺、生物安全柜,、自動提取儀,、實時熒光定量PCR的使用,加強生物安全方面的培訓,,避免實驗室污染,。目前,PCR已成為實驗室中的一項常規(guī)技術,是分子生物學家們不可缺少的工具.上海國產(chǎn)品牌PCR儀廠家直供
PCR儀 也稱基因擴增儀,是實驗室的一種診斷分析儀器,。力康熒光定量PCR儀批發(fā)價
目前,,采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體,、解脲支原體,、人類瘤病毒、單純皰疹病毒,、人類免疫缺陷病毒,、肝炎病毒、流感病毒,、結核分枝桿菌,、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高,、取樣少,、快速簡便等優(yōu)點。如:結核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在:a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌,;b.檢測TB耐藥基因,;c.提高TB的陽性檢出率。⑵產(chǎn)前診斷到目前為止,,人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法,,只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,,用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,,易為孕婦所接受。⑶藥物療效考核對乙型肝炎病毒(HBV),、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關系,。HCV高水平表達,干擾素作用不敏感,,而HCV低滴度,,干擾素作用敏感;在拉米夫定過程中,,HBV-DNA的血清含量曾有下降,,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發(fā)生變異,。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義:a.了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量,。b.是否復制。c.是否傳染,,傳染性有多強,。d.是否有必要服藥。 力康熒光定量PCR儀批發(fā)價
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