外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,,多角度進行鑒定,。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9,、CD63和CD81;細胞質(zhì)蛋白,,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins),;使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,。外泌體提取的方法:過濾。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細胞來源的外泌體,,包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞),、病細胞、上皮細胞和間充質(zhì)細胞,,釋放出帶有載體的外泌體,,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng)中受體細胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響,,刺激或壓制其增殖和功能,。外泌體與代謝性和心血管疾病:外泌體可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用,。體外培養(yǎng)心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關的代謝適應有關,;體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需沉淀試劑,,也無需過夜培養(yǎng),。
研究初次發(fā)現(xiàn)瘧原蟲傳染小鼠血漿外泌體(exosomes)能夠壓制一些病癥血管生成,并初步闡明其分子機制,。研究加深了對瘧原蟲傳染宿主所分泌的外泌體與一些病癥血管生成之間的相互作用的認識,,為開發(fā)瘧原蟲傳染來源的外泌體作為一種新型抗一些病癥制劑奠定了基礎。研究人員選用肺病小鼠模型作為研究對象,,從傳染瘧原蟲的小鼠血漿中獲得外泌體,,并將這些外泌體注射到小鼠的一些病癥內(nèi)部,,并與沒有瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體進行對照。研究發(fā)現(xiàn),,瘧原蟲傳染小鼠的血漿外泌體明顯壓制一些病癥血管的生成,。進一步的研究發(fā)現(xiàn),瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體通過至少四種特殊的微小RNA(miR16-5p/17-5p/322-5p/497-5p)壓制血管內(nèi)皮細胞VEGF受體(VEGFR2)的表達從而阻斷血管生成的信號通路,。這些發(fā)現(xiàn)加深了人們對瘧原蟲抗病機理的理解,,并為瘧原蟲療法治病一些疾病的臨床研究提供進一步的理論依據(jù)。
外泌體的提取方法,,先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質(zhì)干細胞進行饑餓培養(yǎng),,這樣可使干細胞處于正常生長狀態(tài),不會被克制生長增殖,,其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體,,然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進行低速差速離心(即先一離心處理、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片,,用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液,,將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌,過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì),,進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液,因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮,,這樣過濾除菌效率得到較大提高,,較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體。外泌體的提取分離:PEG-base沉淀法,。
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷(應用潛能):外泌體生成機制表明,,通過分析外泌體的組分,可以幫助識別其來源的細胞類型,。這一特性已被應用于開發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關疾病中進行研發(fā)測試,。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層外泌體提取:樣品中大分子不能進入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,,被流動相洗脫出來,。重慶外泌體提取試劑直銷價
外泌體提取:在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷
外泌體在肺病治病中的作用:有研究發(fā)現(xiàn),使用外泌體運載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細胞對PTX的吸收,,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細胞毒性,,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。Aqil等在進行裸鼠實驗時發(fā)現(xiàn),,加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強的抗一些病癥功效,,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,,外泌體制劑可以有效增強CEL功效并降低與劑量有關的毒性,。到目前為止,外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,,有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關的潛在治病靶點的探索,。已有的研究表明外泌體在肺病治病領域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病治病領域早日得到突破,,造福更多的患者,。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家直銷