近年來,,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應用已經(jīng)涉及一些病癥治病領域、醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體來源及內含物,。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體,,同時外泌體也普遍存在于體液中,包括血液,、眼淚,、尿液、唾液,、乳汁,、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸(microRNA,、lncRNA,、circRNA、mRNA,、tRNA等),、蛋白、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81、CD9,、TSG101,、HSP27等。外泌體鑒定,。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM),、Nanosight、WesternBlot,、流式細胞術,。外泌體的提取分離:超濾離心。唐山外泌體提取試劑銷售廠家
外泌體可通過流式,、WB(檢測指標有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,,普遍應用于藥物載體,、疾病診斷marker、精細醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,樣本含量低,,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等。但到目前為止,,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進行物質運輸和信息交流的重要工具,,可以通過調節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉移。與細菌傳染,,幫助細菌逃避免疫關系很大,,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關系金華外泌體提取試劑直銷廠家外泌體提?。焊咚匐x心沉淀外泌體,。
外泌體(exosomes)是活細胞經(jīng)過"內吞-融合-外排"等一系列調控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內體(也稱為多囊泡體),,直徑約為30-150nm,,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液,、唾液,、尿液及母乳等體液中,同時外泌體也存在于組織和細胞間隙中,。人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體,,人體中大約有1014個外泌體,大約平均每個細胞產(chǎn)生1000-10000個,。外泌體中含有核酸(DNA,、miRNA、lncRNA,、mRNA,、tRF等)、蛋白和脂類,,在細胞間物質和信息轉導中發(fā)揮重要作用,,研究表明其在干細胞、免疫調控,、瘤轉移,、血管生成以及生物標志物等領域都發(fā)揮著不可替代的作用
外泌體與肺病預后:外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發(fā)現(xiàn),,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA,,其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調,進一步研究發(fā)現(xiàn),,let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術臨床常規(guī)化應用的關鍵可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,,以評估近似外泌體大小范圍和濃度,。
外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調節(jié)性T細胞,,壓制機體的抗一些病癥免疫反應,;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,,從而導致一些病癥的生長和轉移。在肺病的侵襲和轉移過程中,,細胞間通訊扮演著重要的角色,。據(jù)有關報道稱,NSCLC分泌的外泌體內TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關,。此外,,啟動的T細胞可以通過調控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,進而促進肺病的轉移,。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點,。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移,但也有報道稱,,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖,。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),,顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:樣本輸入量多樣。長沙外泌體提取試劑哪里買
外泌體是一種能被機體內大多數(shù)細胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質雙層膜的微小膜泡,。唐山外泌體提取試劑銷售廠家
外泌體表面有其特異性標記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,,難以普遍普及,。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集菌類,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質疑,。如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,。唐山外泌體提取試劑銷售廠家