外泌體可通過流式、WB(檢測指標有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應用于藥物載體,、疾病診斷marker,、精細醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,,樣本含量低,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心,、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等,。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性,。外泌體是細胞間進行物質運輸和信息交流的重要工具,可以通過調節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉移,。與細菌傳染,幫助細菌逃避免疫關系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關系。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需蛋白酶處理,。合肥外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體(exosome)是所有細胞釋放出的細菌大小的顆粒,。它們天然地存在于血液中。根據(jù)來自美國德州大學MD安德森一些疾病中心的一項新的研究,,對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法,。論文通信作者為德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學系研究員RaghuKalluri博士。在這項新的研究中,,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,,從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細胞中的KRAS突變基因,,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負荷和存活。他們證實外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,這是因為這些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內遷移和進入靶細胞(包括病細胞)中,。上海正規(guī)外泌體提取試劑單價可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。
當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,,外泌體可通過其攜帶的蛋白質,、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性,。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,,進而啟動靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而啟動細胞內的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質,、mRNA以及microRNA,。人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞,、免疫細胞,、血小板、平滑肌細胞等,。
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細胞來源的外泌體,,包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞)、病細胞,、上皮細胞和間充質細胞,,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng)中受體細胞的增殖和各自的活性,。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響,,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用,。體外培養(yǎng)心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關的代謝適應有關;體外培養(yǎng)的間充質干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用,。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,,蛋白等物質改變受體細胞的代謝狀態(tài)。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。外泌體提取色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法,。
目前的主流觀點認為,,外泌體的產(chǎn)生過程為:細胞膜內陷,,形成內體(endosome),,再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),,較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質、脂類,、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年,EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結構的小囊泡,,并命名為exosome,。對于外泌體的作用,當時推測為細胞排泄廢物的一種方式,。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),,所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+細胞的抗一些病癥反應。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質,。隨著有關外泌體研究越來越多,,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應答、抗原呈遞,、細胞分化,、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠,、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。用于外泌體提取的體液收集注意事項:避免劇烈搖晃,。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應
用于外泌體提取的體液收集注意事項:操作要輕柔迅速。合肥外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體的提取分離:1,、超濾離心,。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質,,利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,,是提取細胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63,、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,,即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實驗,,難以普遍普及。合肥外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家