鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,。寧波正規(guī)鼠尾膠原

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。目前,，臨床上常用的有人工骨移植,、自體骨移植和同種異體骨移植。其中,，人工骨材料多為磷酸三鈣,、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無機(jī)礦物材料[1-2]，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白,，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織,。但是，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織,，數(shù)量有限,，難以滿足臨床需要。因此,，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo)。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物,，在分子結(jié)構(gòu)上,，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙,，沿著膠原纖維的長軸縱向礦化生長,。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu)，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白,，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。寧波正規(guī)鼠尾膠原鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上， pH 左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚,、筋、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì),。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一，不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,，有脯氨酸和羥脯氨酸。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,，膠原蛋白分為20幾個亞型,。但較為常見的為Ι、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,，即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。I型膠原蛋白分布非常普遍,，是主纖維束的主要成分，給結(jié)締組織以強(qiáng)度,；是較豐富的膠原蛋白類型,，尤其是在皮膚真皮、骨,、筋和腱中,。

詳細(xì)步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開,、去掉皮毛,，并剪成小段（3cm左右）,，抽出銀色的尾鍵,；3.把剪碎的尾鍵置于150ml，0.1％消過毒的醋酸中,，4℃放置,，并不時振蕩；4.48h后取上清,，4000轉(zhuǎn)離心30min后,，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存,。有時可繼續(xù)向4,。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復(fù)以上步驟,，以制備更多的鼠尾膠,。在使用時,，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液,，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液,。2）若包被的是培養(yǎng)瓶，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶內(nèi)后,，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話,，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi)，蓋緊飯盒蓋,，四周用封口膠封死,。在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。

鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,，為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞，培養(yǎng)7天時進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,，平均厚度約為1mm；HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開,；掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接；同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動頻率是相同的,；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液,。南昌正規(guī)鼠尾膠原哪里買

鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。寧波正規(guī)鼠尾膠原

要準(zhǔn)備的器具：組織剪2把，有齒鑷1把,，無齒鑷1把,，200ml燒杯1個，培養(yǎng)皿1個,，帶蓋廣口瓶1個,，離心管、小瓶數(shù)個，滴管若干,。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌,。需配制的液體0.1％醋酸溶液。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用,。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液,。取大鼠尾巴，洗凈,，置75%酒精浸泡消毒后,，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高,，折斷尾骨后拉出尾腱,，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱尾腱的重量,，按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液,，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置48小時,，離心。吸取其上清,，分裝至小瓶,，4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成,。寧波正規(guī)鼠尾膠原