細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融,，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護劑,，會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,，PH,，電解質(zhì)等的改變，進而促使細(xì)胞死亡,。在過去的幾十年中,，科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,，并配合手工使細(xì)胞從4℃,，-20℃，-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果,。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短,，不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求,。且這樣人力和時間成本大,，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結(jié)果帶來了不穩(wěn)定性。存細(xì)胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,。合肥無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹

無血清細(xì)胞凍存液對比含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%,，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液,。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘,，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存,。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量的死亡,。）徐州石家莊無血清細(xì)胞凍存液無血清細(xì)胞凍存液,，為多種保護劑組合。

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷,。理論上儲存時間是無限的,。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法：1.從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍,。2.待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后,，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,，混合均勻,。3.離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃,，3~5min）,，移去上清液。4.清洗細(xì)胞,，充分洗凈殘留凍存液,。5.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后,，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中,。6.鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細(xì)胞培養(yǎng),。無血清細(xì)胞凍存液,，含多種保護劑成分。

細(xì)胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；2.取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來,；4.離心1000rpm,，5min；5.去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml,；6.將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml,；7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,，凍存時間及操作者；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min,；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時,，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。無血清凍存液用途：細(xì)胞保藏中心,，無血清細(xì)胞凍存液用于細(xì)胞株的長期保存,。成都無血清細(xì)胞凍存液廠家推薦

無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢：不含血清，較大減少細(xì)胞污染,。合肥無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹

無血清細(xì)胞凍存液,，通用于人和各種動物細(xì)胞株,。特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含動物來源性蛋白,，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細(xì)胞安全,。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存,。產(chǎn)品特色：不含動物源成分,，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性,。成分明確，無批次差異,?？芍苯哟娣庞?80℃冰箱凍存，無需經(jīng)過費時的程序降溫過程（省時,、省力,、省錢）。獨特配方有效提高細(xì)胞凍存存活率及復(fù)蘇率,。即用型,，無需現(xiàn)配，即開即用,。通用型,，適用于凍存各種細(xì)胞系，原代細(xì)胞,?？晌⒘浚粌龃?，例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,，省時高效。存儲條件：儲存于4℃以下,質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,，為期兩年,。3個月以上沒有使用凍存液計劃時，盡可能-20℃冷凍保存,。為避免重復(fù)凍融過程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,，推薦將產(chǎn)品分裝成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存,。合肥無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品介紹