鼠尾膠原：1實(shí)驗(yàn)制備：實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理鹽水、75%酒精,、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆,、鼠尾膠原。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1,、制備鼠尾膠原（兩個(gè)同學(xué)一組操作）,。2、切割小玻片,。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。實(shí)驗(yàn)步驟：制備鼠尾膠原：1,、取大鼠尾巴洗凈,，75%酒精浸泡5分鐘；2,、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱,；3,、將尾腱剪斷置于平皿中,，生理鹽水浸泡；4,、重復(fù)步驟2,、3，直至尾腱量夠用,；5,、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）,?？捎糜谥苽淙S膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng),。金華正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨

使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無(wú)菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時(shí)后,，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間,。2,、三維膠原凝膠的制備：A、無(wú)細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,，加入690μL雙蒸水,，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。廈門成都鼠尾膠原鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,，可用于化妝品，工業(yè)和食品生產(chǎn)等領(lǐng)域。

含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡(jiǎn)化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無(wú)菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu),。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用,。

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,，對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究,。目的：探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實(shí)驗(yàn)組）和普通培養(yǎng)皿（對(duì)照組）中，并且均用0,，10,，100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后,，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),，應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率，TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,，黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,，Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá)。生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境。金華正規(guī)鼠尾膠原報(bào)價(jià)

膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,。金華正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究,。目的:探討鼠尾膠原對(duì)過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實(shí)驗(yàn)組)和普通培養(yǎng)皿(對(duì)照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導(dǎo),。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,Western-Blot檢測(cè)凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá)。金華正規(guī)鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨