外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液,、尿液、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞(免疫細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞),,都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,,也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA,、miRNA,、lncRNA,、circRNA,甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,,參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,,不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病,。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,,它可以通過(guò)外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能。通過(guò)檢測(cè)外泌體中miRNA表達(dá)變化,,可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能,。外泌體提取:使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體,。天津正規(guī)外泌體提取試劑
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細(xì)胞來(lái)源的外泌體,,包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)、病細(xì)胞,、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞,,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性,。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響,,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過(guò)攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過(guò)程中起作用,。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān);體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護(hù)心血管的作用,。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來(lái)源的外泌體可以通過(guò)傳遞miRNA,,蛋白等物質(zhì)改變受體細(xì)胞的代謝狀態(tài)。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷唐山外泌體提取試劑廠家將人尿液來(lái)源細(xì)胞的培養(yǎng)基通過(guò)0.22微米濾膜過(guò)濾,,以去除大的細(xì)胞殘片以及其它雜質(zhì),。
外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),,用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,,即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及,。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類,現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體,,其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),,顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等,,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑,。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽(yáng)性),,顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物。
外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,,如腦組織,、肌肉組織、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡(jiǎn)述:將腦組織剪成薄片,,放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,,置于冰上,。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程,包括除雜,、濾膜過(guò)濾,、超離等。較后用PBS重懸外泌體,,用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。外泌體提?。好庖叻蛛x技術(shù),。
外泌體的形成與鑒定:首先,細(xì)胞膜內(nèi)陷形成一個(gè)杯狀結(jié)構(gòu),,包括細(xì)胞表面蛋白和與細(xì)胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白,,導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome,ESE)的從頭形成,,或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合,;trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,,LSEs),,較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體)。MVBs是通過(guò)endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,,這一過(guò)程導(dǎo)致MVBs含有多個(gè)ILVs,。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白,、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA,、DNA,、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜,,通過(guò)離心截留上清中的外泌體,,截留完成后。外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究,。鄭州外泌體提取試劑單價(jià)
靜置10~15分鐘,,留取沉淀物備用。天津正規(guī)外泌體提取試劑
外泌體項(xiàng)目獲批學(xué)科方向:從統(tǒng)計(jì)來(lái)看,,與前年相似外泌體立項(xiàng)集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué),,近年來(lái)外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成,耐藥性,,檢測(cè)等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過(guò)TLR7/NFκB/c-My信號(hào)通路在女性食管ai中促進(jìn)維持ai癥干細(xì)胞樣細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡,。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)p-STAT3可促進(jìn)結(jié)直腸ai細(xì)胞獲得性5-FU耐藥性,。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細(xì)胞外囊泡相關(guān)的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標(biāo)志物的可能性。此外,,在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病,,中醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域也有不少外泌體相關(guān)項(xiàng)目中標(biāo)。外泌體提取試劑直銷價(jià)外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷天津正規(guī)外泌體提取試劑
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