影響轉(zhuǎn)染試驗(yàn)的因素：細(xì)胞狀態(tài)變化：（1）轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞，也不是傳代很多次的細(xì)胞,。這是因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,，較容易轉(zhuǎn)染。（2）把握時(shí)機(jī)沒錯(cuò),！轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī),，相比較非分裂細(xì)胞——分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA。因此對(duì)大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言,，細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板,。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)不應(yīng)處于過度生長(zhǎng)的狀態(tài)，如細(xì)胞數(shù)量過多,，互相疊加,，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗竭，代謝廢物積聚,，轉(zhuǎn)染率低下也是很正常的,！使用基質(zhì)珠做為固相支持可以使貼壁細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。合肥鄭州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物,。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,，這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。如果隨時(shí)間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會(huì)恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性,。比如,，新鮮融化的NIH3T3細(xì)胞比傳代8次的細(xì)胞表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率，融化細(xì)胞的進(jìn)一步傳代并沒有降低轉(zhuǎn)染效率,。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,。蕪湖珠海細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染是將外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程,，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)原理外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法,、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和細(xì)菌介導(dǎo)法,。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入;磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞;細(xì)菌法是利用包裝了外源基因的細(xì)菌傳染細(xì)胞的方法使得其進(jìn)入細(xì)胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實(shí)驗(yàn)條件控制較嚴(yán),、難度較大;細(xì)菌法的前期準(zhǔn)備較復(fù)雜,、而且可能對(duì)于細(xì)胞有較大影響;所以現(xiàn)在對(duì)于很多普通細(xì)胞系，一般的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.試劑過期有時(shí)候轉(zhuǎn)染效率低下,，還要考慮會(huì)不會(huì)存在試劑過期的情況,。毛博當(dāng)年做轉(zhuǎn)染整整半年,，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),，盡量使用開封半年內(nèi)的，因?yàn)檫^了半年后,，就算沒有過失效期,，但是細(xì)胞毒性較大增加，而轉(zhuǎn)染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢,，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度哈。2.未加血清轉(zhuǎn)染后未及時(shí)加入血清,，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡,。一般要在轉(zhuǎn)染后的4-6小時(shí)換液且換為有血清的培養(yǎng)基。根據(jù)毛博的經(jīng)驗(yàn),，其實(shí)也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清,。這個(gè)時(shí)候，較好不要換液,，不要打擾細(xì)胞,，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清,。過早的話,，會(huì)引起未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞瘋狂生長(zhǎng)。操作簡(jiǎn)便,，對(duì)細(xì)胞毒性小,，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞,。

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成,，這對(duì)大分子物質(zhì)來說是個(gè)不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架,，其也帶負(fù)電荷,。為了使核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù),，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個(gè)瞬時(shí)的孔從而導(dǎo)入DNA,。然而,，沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響較小,，并且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)?？梢允褂靡恍I(yíng)養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。上海正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商

是目前實(shí)驗(yàn)室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法。合肥鄭州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低,。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用物品,。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤(rùn)洗細(xì)胞,。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競(jìng)爭(zhēng)性克制劑,。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng)，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量,。合肥鄭州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

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