外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來眾多文獻報道,,肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質并促進肺病的發(fā)生的發(fā)展,,是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發(fā)現(xiàn),,NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物,。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質,,進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導途徑以促進一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學標記物,。近幾年來,,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒。外泌體提?。夯诰酆衔锏某恋砑夹g通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,。長沙正規(guī)外泌體提取試劑哪里買
近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,,它的應用已經(jīng)涉及一些病癥治病領域,、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域,;臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體來源及內含物,。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體,,同時外泌體也普遍存在于體液中,包括血液,、眼淚,、尿液、唾液,、乳汁,、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸(microRNA,、lncRNA,、circRNA、mRNA,、tRNA等),、蛋白、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81、CD9,、TSG101,、HSP27等,。外泌體鑒定。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM),、Nanosight,、WesternBlot、流式細胞術,。上海外泌體提取試劑外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:純化和富集的完整血漿/血清,,尿液和細胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究。
來源于不同的組織的外泌體不僅具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關鍵分子,。有關外泌體分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制近些年剛剛開始受到關注,,與外泌體相關的被pubmed收錄的文章數(shù)量和國自然基金項目中標數(shù)量逐年增長,表明國內外對外泌體的研究興趣日益增長,。細胞外囊泡是蛋白質,、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體、微泡和凋亡小體,。其中,,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,由多種細胞分泌,,內含有特定的蛋白質,、脂質、細胞因子或遺傳物質,。
外泌體,,是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,,直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物,。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,,如免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標志物,。外泌體提取:樣本的粘度與分離的外泌體純度有顯著的相關性,。
用于外泌體提取的體液收集注意事項:1,、選擇血清還是血漿?推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體,,含量占血清中外泌體的50%以上,選擇血漿可避免不必要的影響,。2,、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關,,這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用,。除了克制PCR,肝素可以與外泌體結合,,阻止細胞攝取外泌體,。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達莫(CTAD),,CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體,。EDTA可能會干擾PCR反應(盡管其程度小于肝素),但是還是優(yōu)于其他選擇,。此外,,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量,。使用肝素時這種影響就不會發(fā)生,,因此建議在測量外泌體的精確數(shù)量時選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導致體外條件下外泌體的減少,??傊壳吧行枰嗟难芯空撟C抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放,,作用和下游反應產(chǎn)生特異性影響,。用于外泌體提取的體液收集注意事項:避免劇烈搖晃。上海外泌體提取試劑直銷價
超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,,由于離心步驟繁瑣,。長沙正規(guī)外泌體提取試劑哪里買
外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調節(jié)性T細胞,,壓制機體的抗一些病癥免疫反應,;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,,可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,,從而導致一些病癥的生長和轉移,。在肺病的侵襲和轉移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色,。據(jù)有關報道稱,,NSCLC分泌的外泌體內TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關。此外,,啟動的T細胞可以通過調控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,,進而促進肺病的轉移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點,。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移,,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖,。如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物。長沙正規(guī)外泌體提取試劑哪里買