鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗,。鼠尾膠原醋酸溶解：按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。北京鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項：在室溫下pH中性時可迅速成膠,，在操作過程中要盡量保持低溫,。無錫鼠尾膠原直銷廠家利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I,、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水、無菌1MNaOH,。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻,，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6）使用時,，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。

鼠尾膠原的生物礦化和TEM觀察：果凍樣Ⅰ型膠原蛋白膠體初始浸泡在礦化液中時呈微白色；礦化2d后,，膠體的顏色逐漸加深至乳白色,；礦化6d后，隨著羥基磷灰石晶體礦化長入膠原纖維內(nèi)部,，膠體顏色加深至純白色,，并在膠體表面沉積了一層薄薄的羥基磷灰石鈣晶體，予鑷子夾起,，其表層羥基磷灰石鈣晶體破碎散落,。TEM表征顯示：礦化2d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔周期性條紋結(jié)構(gòu)逐漸模糊,，羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維內(nèi)部,，膠原纖維部分礦化，沿著膠原纖維生長,，忖度變深,；礦化6d后，Ⅰ型膠原纖維的明暗相隔D-Band結(jié)構(gòu)完全消失,，膠原纖維內(nèi)部可以看到黑色羥基磷灰石晶體,，嵌入膠原纖維縱向生長。當(dāng)鼠尾Ⅰ型膠原纖維完全礦化時，由于整條膠原纖維都被羥基磷灰石鈣晶體占據(jù),，膠原纖維呈現(xiàn)黑色,，選區(qū)衍射斑圖符合羥基磷灰石表征。鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,，pH7左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗長時程的記錄,。貴陽鼠尾膠原廠家供應(yīng)

利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。北京鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料,、試劑和儀器鼠尾,、鹽酸、等滲氯化鈉溶液,、鈣液,、磷液均購自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司),；多功能粉末X射線衍射儀,。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min,。將尾巴剪開,，去掉皮毛，并剪成小段,，抽出銀色的肌腱,。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無菌等滲氯化鈉溶液浸泡,。吸去等滲氯化鈉溶液,，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液,。搖晃,，將肌鍵分散于醋酸溶液中,，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min,。在醋酸溶液的酸解下,，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。北京鼠尾膠原生產(chǎn)廠家